일반기술
보건·의료 > 임상시험·진단관련
콜레스테롤 에스터라제를 특이적으로 인지하여 결합할 수 있는 단세포군 항체 단백질와 이 항체를 분비하는 융합세포주에 관한 것으로, 콜레스테롤의 흡수에 중요한 역할을 하고 있는 효소인 콜레스테롤 에스터라제를 생체 또는 병리학적 시료로부터 간편하고 예민하게 검출 및 정량할 수 있는 수단으로서의 단세포군 항체, 이를 균질로 대량 생산할 수 있는 융합세포주를 이용한 단세포군 항체의 제조방법이다. 소의 췌장으로부터 콜레스테롤 에스터라제를 순수분리 정제하고, 이것으로 생쥐(Balb/c)를 면역시킨 다음, 생쥐의 비장 세포를 분리하여 골수종(myeloma) 세포와 융합시킴으로써, 본 항체를 분비하면서 계속적으로 배양이 가능한 새로운 융합세포주에 관한 것이며 또한 이 세포주를 배양하여 그 배양액으로부터 균질의 항체를 필요한 만큼 대량으로 생산할 수 있게 하는 방법이다. 신규 단세포군 항체는 포유동물의 콜레스테롤 에스터라제에만 특이적으로 반응하는 성질을 가지며, 또한 본 기술에서 얻어진 항체 분비 융합세포주는 균질한 단세포군 항체를 향상 생산할 수 있는 융합된 세포주로서, 의학적인 진단, 연구와 콜레스테롤 대사에 관련된 생리, 병리 등의 연구의 좋은 수단으로 이용될 수 있다.콜레스테롤은 보통 음식중에서는 대부분 콜레스테롤 에스터 형태로 존재하며, 섭취되면 십이지장에서 콜레스테롤 에스터라제에 의해 분배되어 나온 콜레스테롤 형태로 흡수된다. 콜레스테롤 에스터라제는 분자량이 72,000인 폴리펩타이드로서 췌장에만 특이적으로 분포하고 있는 췌장의 아시나 세포내의 성숙된 분비 소포체에만 존재하며 소화에 관여하고 있다. 한편, 췌장의 세포 변화를 초래하는 여러 가지 질병(췌장암, 췌장염 등)의 초기진단에 있어서 췌장에 특이적으로 존재하고 있는 콜레스테롤 에스터라제를 활성 측정이 아닌 효소 자체의 단백질량을 항체를 이용하여 정량하면, 특이성이 높고 예민한 측정 방법을 개발할 수 있는 것으로 판단된다. 현재까지 콜레스테롤 에스터라제에 대한 단세포군 항체가 개발된 바 없으며, 콜레스테롤 에스터라제 자체에 대한 성질과 생리 및 병리적 의미도 규명 초기단계에 있어 본 항체는 임상진단에 있어서만 아니라, 연구의 중요한 수단으로 활용될 수 있다.본 기술에 의해 얻어지는 항체는 소의 콜레스테롤 에스터라제에 대한 생쥐에서 생성된 면역글로불린 G1의 균질한 단백질로서, 췌장으로부터 분리되는 분자량 72,000과 67,000의 콜레스테롤 에스터라제를 모두 인식할 수 있으며, 소뿐만 아니라 포유동물의 콜레스테롤 에스터라제에 특이하게 반응성을 갖는다
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- 포항공과대학교
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- 2001-06-23
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
포스포리파제 C-감마2 동위효소를 특이적으로 인지하여 결합할 수 있는 단클론성 항체 단백질, 이를 분비하는 융합세포주에 관한 것으로, 세포내 신호전달체계에 있어서 중추적 역할을 하는 효소인 포스포리파제 C-감마2를 생체 또는 병리학적 시료로부터 간편하고 민감하게 검출 및 정량할 수 있는 수단으로서의 단클론성 항체와 이를 균질로 대량 생산할 수 있는 융합세포주 및 이들 융합세포주를 이용한 상기 단클론성 항체를 제조하는 방법이다.즉, 사람의 포스포리파제 C-감마2 동위효소를 순수 분리 정제하고, 이것으로 생쥐(Balb/c)를 면역시킨 후, 이들로부터 비장 세포를 분리하여 생쥐의 골수종 세포인 Sp2/0-Ag14 세포와 융합시킴으로써, 단클론성 항체를 분비하면서 계속적으로 세포배양이 가능한 새로운 잡종 세포주를 개발하고, 이 세포주를 배양하여 그 배양액으로부터 균질의 항체를 대량으로 생산하는 방법이다. 본 기술은 포유동물 세포의 생리 활성, 분화 및 성장 조절을 연구하는 기초 생물학 연구의 좋은 수단으로 이용될 수 있을 뿐만 아니라, 단클론성 항체는 포유동물의 포스포리파제 C-감마2 효소에만 특이적으로 반응하는 성질을 갖고 있으므로, 세포내 신호전달체계에 관한 연구에 응용하여, 암 등 관련질병의 기작을 밝히는데 사용될 수 있다포스포리파제 C는 외부의 신호를 받아 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트로부터 디아실글리세롤 및 이노시톨 1,4,5-트리스포스페이트를 생성함으로써, protein kinase C를 활성화시키고 칼슘 이온을 세포질로 방출하게 하는 등 세포내 현상, 특히 신호전달계의 중심 효소이다.이중 포스포리파제 C-감마 동위효소는 세포의 성장과 분화, 호르몬이나 소화 효소의 분비 및 다른 신호전달체계의 조절에 중추적인 역할을 하고 있으며, 이에 따라 포스포리파제 C-감마 동위효소의 역할과 작용기전 등에 관한 연구가 암, 내분비 및 의약품 연구자들의 관심의 대상이 되고 있다. 항체는 다양한 서브타입 특이적인 2차 항체를 사용한 효소면역측정법에서, 사람의 포스포리파제 C-감마2 동위효소에 대해 생쥐에 생성된 면역 글로불린 M이며, 포스포리파제 C 효소중 분자량 145,000의 포스포리파제 C-감마1 동위효소와는 교차 반응성을 나타내지 않으나, 분자량 140,000의 포스포리파제 C-감마2 동위효소는 특이적으로 인지하였다. 즉, 본 항체는 뛰어난 친화력으로 세포내에 극미량으로 존재하는 포스포리파제 C-감마2 동위효소만을 특이적으로 인지할 수 있으며, 더욱이 소뿐만 아니라 모든 포유동물의 포스포리파제 C-감마2 동위효소에 특이적으로 반응하는 특징을 가지고 있
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- 포항공과대학교
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- 2001-06-23
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일반기술
생명과학 > 기타 생명과학
극히 빠른 속도로 DNA 염기서열을 결정하는 장치로서, 자동화 판 겔 전기영동 시스템보다 더 신속하게 DNA 염기서열을 결정한다. 본 분석장치는 모세관으로 전개한 시료에 광을 조사하여 시료를 분석함에 있어, 시료에 조사되기 위한 서로 다른 파장의 광을 제공하기 위한 광원수단과, 시료가 광에 의해 스캔되도록 모세관을 이동시키는 수단, 광을 시료에 조사하여 발생한 빛을 집속하기 위한 수단과 상기 집속된 빛에서 시료와 상호작용하는 파장을 선택하기 위한 수단 및 상기 선택된 파장의 광을 검출하기 위한 수단을 포함하여 구성된다. 본 기술에 의한 분리후 스캔-검출 장치는 모세관으로 전개된 시료를 신속히 검출하여 매우 빠르게 시료를 분석할 수 있으며 특히 DNA염기서열을 결정하는데 유용하게 사용될 수 있다. 더욱이, 여러 가지 시료를 분석해야 하는 경우에 전체 분석시간을 단축시킬 수 있으며, 광원으로 레이저를 사용하는 경우에 값비싼 레이저의 실제 사용시간을 줄일 수 있다DNA 염기서열 결정은 생명과학에서 매우 중요한 연구 수단이다. 현재 일반적으로 사용되고 있는 방법은 동위원소가 치환된 염기서열 결정반응 생성물의 폴리아크릴마이드 겔 전기영동으로 분자량에 따라 분리하고 방사선 자동사진법으로 각 성분을 검출하여 DNA 염기서열을 결정하는 것이다. 최근에는 분리 속도가 빠른 모세관 때문에 겔 전기영동(CGE)을 DNA 염기서열 결정에 이용하려는 연구가 많이 수행되고 있다. CGE는 판 겔 전기영동보다 개별적인 분리속도가 월등히 빨라 DNA 염기서열 결정법에 유용한 분리 방법이지만, 일반적인 CGE에서는 염기서열 결정반응 생성물을 하나의 모세관을 사용하여 전개, 분리하면서 검출하기 때문에 여러 개의 시료를 동시에 분리, 검출할 수 없다는 단점이 있다. 본 기술에서는 CGE의 빠른 분리속도가 갖는 이점을 충분히 실리기 위하여, DNA 시료를 CGE로 일단 분리한 다음 모세관을 레이저로 스캔(scan)하여 DNA 염기서열을 결정하는 방법을 개발하였다. 스캔에 소요되는 시간은 수 분 정도로써 CGE에 걸리는 시간보다 훨씬 짧으므로, 여러 개의 시료를 여러 개의 모세관으로 동시에 CGE 시킨 뒤 모세관 하나씩을 레이저로 스캔하면서 이때 발생하는 레이저 유발형광을 검출하여 DNA 염기서열을 결정하면, 전체적인 염기서열 결정속도가 몇십배 빨라진다.즉, 모세관 겔 전기영동 전개와 검출과정을 따로 분리함으로써, 단위시간에 분석할 수 있는 시료의 수가 현저히 증가될 수 있다. 또한, DNA 염기서열결정법외에도 모세관 크로마토그래피 등에 본 기술의 장치를 이용하여 모세관으로 전개한 시료에 상호작용하는 적합한 파장의 광원을 선택함으로써 시료를 분석할 수도 있다.
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- 포항공과대학교
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- 2001-05-16
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일반기술
보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
신호전달체계에 관여하는 효소들의 활성인자 또는 억제제로 유용한 이노시톨 유도체에 관한 것으로, 미오-이노시톨-1,4-디벤조일-2,3:5,6-디이소프로필리딘을 가수분해시켜 미오-이노시톨-1,4-디벤조에이트를 수득하고, 이 화합물로부터 염기조건에서 벤조일기를 이동시켜 얻은, 여러 위치이성체들의 혼합물을 분리시키고, 각 화합물의 하이드록시기를 인산화 또는 티오인산화하고 벤조일기를 제거함으로써 미오-이노시톨 유도체를 얻는다세포막 구성성분의 하나인 포스파티딜이노시톨-4,5비스포스페이트는 포스포리파제 C에 의해 디아실글리세롤(DAG)과 D-미오-이노시톨-1,4,5-삼인산(IP3)의 두 가지 이차전달자를 형성한다. 이때 생성된 두 가지 이차전달자중 D-미오-이노시톨-1,4,5-삼인산은 세포내 칼슘의 동적 평형에 관계한다. 따라서, 세포내의 이노시톨-1,4,5-삼인산의 조절은 약학적인 측면에 있어서 치료제의 개발과 관련하여 매우 중요한 의미를 갖는다. 현재 정신질환 치료제로 사용되는 리튬도 세포내 이노시톨 농도를 조절함으로써 세포내 칼슘 평형에 관여한다는 점에 기인한 것으로, 리튬은 이노시톨의 대사과정중 포스파타제를 억제하는 효과가 있는 것으로 보고된 바 있다.본 기술은 이러한 세포의 신호전달물질로서 중요한 역할을 하는 Inositol Phosphates와 그 유사체들을 한꺼번에 "아실기의 이동" 현상을 통해 제조할 수 있는 효율적인 기술을 제공한다.따라서 종래의 이노시톨 유도체보다 탁월한 효소활성을 나타낼 수 있는 신규의 다양한 이노시톨 유도체를 단일 출발물질로부터 동시에 생성시킬 수 있으며, 신호전달체계의 효소 활성과 관련되는 질병의 치료 및 예방에 유용하게 사용될 수 있다
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- 포항공과대학교
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- 2001-05-16
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일반기술
보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
α-아미노산 또는 그 유도체를 광활성적으로 제조하는 방법으로, 프롤린이나 그 유사체를 키랄보조기로 사용하여, 친전자체 시약과 반응시켜 아미도고리화시킨 후 생성된 물질을 환원시켜 친전자체 기능기를 제거하고 산성조건하에서 가수분해시켜 광활성 α-아미노산을 얻는다.α-아미노산을 제조하기 위해서는 디하이드로아미노산의 수소 첨가반응, 글라이신의 알킬화 반응, α-아미네이션 반응 또는 α-카르복실화 반응 등의 방법이 이론적으로 가능한데, 본 기술은 분자내 α-아미네이션 반응을 이용하여 α-아미노산 또는 이의 유도체를 높은 광학수율로 제조하는 방법을 제공한다.아미노산에는 천연단백질의 성분이 되는 약 20개의 α-아미노산과 단백질의 구성성분이 아닌 약 700여 개의 비단백질성 아미노산이 알려져 있다. 아미노산의 제조에는 발효에 의한 방법, 단백질의 가수분해에 의한 방법, 효소를 이용한 합성방법 유기합성에 의한 방법이 널리 사용되고 있다. 그러나, 효소억제제, 항생제 및 생리활성물질의 선도체 등에는 다양한 구조와 입체성을 가진 아미노산이 필요하므로 유기합성으로 광활성 아미노산을 제조하는 방법이 보다 중요시되고 있다. 광활성 아미노산을 합성적으로 제조하기 위해서는 광활성이 없는 아미노산을 합성한 후 이를 광활성 분해하는 방법과 처음부터 광활성 합성을 수행하는 방법을 이용할 수 있다. 본 기술에서 프롤린이나 그 유사체를 키랄보조기로 사용하여 광활성을 갖는 α-아미노산을 제조하는 방법에 있어서, 최종 화합물의 입체화학은 출발물질중 하나인 프롤린의 α위치의 입체화학에 의존하는 특징이 있다. 고리화반응은 광을 포함하는 촉매의 존재하에서 또는 촉매없이 수행할 수 있으며, 아미도고리화 반응에 의해 생성된 화합물은 그 후 친전자체기를 제거하기 위해 환원되며 그 생성물을 산성 조건하에서 가수분해함으로써 광활성 α-아미노산을 얻을 수 있고, 그 부산물로 얻어진 프롤린은 재사용할 수 있다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-16
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
높은 활성을 갖는 새로운 C형 간염바이러스(HCV) 프로테아제 및 이에 대한 저해제 탐색 방법으로, 효모를 이용하여 HCV의 프로테아제의 생체내에서의 활성을 측정하고, 효모의 유전자 발현체계를 이용하여 HCV 프로테아제의 저해제를 탐색하는 방법이다.즉, DNA 결합 부위와 전사 활성 부위 사이에 HCV프로테아제와 그 기질 부위를 첨가시킨 인위적인 전사활성인자로 된 융합 단백질, 즉 HCV의 헬리카제 부위가 제거되고, NS3의 아미노 말단(N말단)과 NS4A가 직접 결합되어 있는 융합 단백질 형태로 합성된 높은 활성의 HCV 프로테아제를 제조하고, 상기 융합 단백질을 코딩하는 플라스미드를 이용하여 효모를 형질전환시킨 후, 배지 위에 론(lawn)으로 키워 여기에 여러 가지 프로테아제 저해제를 적용하는 저해제 탐색 방법이다. 본 기술에 의하면 높은 효율의 C형 간염바이러스의 프로테아제 재조합 및 프로테아제 활성조사 시스템이 제공되며, 효모의 전사 메커니즘을 이용한 C형 간염 바이러스의 프로테아제에 대한 저해제 스크리닝 시스템이 제공될 수 있다HCV는 비A 비B형 간염의 주된 원인으로서, 간염을 일으키고, 간경변을 거쳐 결국 간암을 유발하는 것으로 알려졌다. HCV는 게놈이 약 3,000개의 아미노산을 코드화하는 (+)센스 RNA로 구성되어 있고 지질의 막으로 싸여 있을 것으로 추정되고 있다. 이 HCV RNA의 구조 단백질에 해당하는 코어와 E1, E2/NS1의 프로세싱은, 숙주 세포의 소포체막에 있는 시그널라제가 작용해서 이루어지고, 그 외의 비구조 단백질들의 프로세싱에는 HCV가 코드화하고 있는 NS3이 프로티애즈로 작용하는 것으로 추정된다. 본 기술에서는 효모의 GAL4 단백질의 활성화 부분에 세균의 Lex A 단백질을 융합하여 인위적인 전사 인자를 생산하였고, 이 전사 인자의 DNA-결합 부위와 전자 활성화 부위 사이에 HCV 프로테아제와 이 프로테아제에 의하여 잘리는 부위를 코드하는 염기 배열을 넣고 융합 단백질을 만들었다. 리포터유전자로 β-갈락토시데이즈를 가지고 있는데, 이 유전자 앞에는 Lex A 단백질 결합 부위가 있어 혼성 단백질의 결합과 전사 활성화 기능에 의해 β-갈락토시데이즈 유전자의 발현 정도가 결정된다. 이 혼성 단백질을 코딩하는 플라스미드를 이용하여 효모를 형질전환시킨 후에 β-갈락토시데이즈의 활성 정도를 측정하여 HCV 프로테아제의 활성 또는 HCV 프로테아제 저해제의 활성을 알 수 있다.
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-23
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일반기술
생명과학 > 효소공학 (H73)
소의 췌장 유래의 프리프로카프복시펩티다제 A (preproCPA) 유전자를 포함한 재조합 발현벡터 및 형질전환된 곤충세포 Sf9 를 이용하여 카르복시펩티다제 A를 제조하는 방법이다. 소의 췌장으로부터 르 휴로우(Le Huerou) 등이 결정한 preproCPA의 뉴클레오티드 서열과는 다른 신규한 preproCPA 유전자를 발견하고, 이를 클로닝하여 그 유전자의 뉴클레오티드 서열을 결정하고, 이 신규한 preproCPA 유전자를 함유한 재조합 발현벡터로 형질전환된 곤충세포 Sf9를 제조하여 이로부터 발현된 proCPA에 트립신을 처리하여 활성 CPA를 다량으로 제공하는 방법이다.소의 카르복시펩티다제 A(CPA)는 한 개의 아연 이온을 포함하는 메탈로엑소펩티다제로서, 소수성 말단 잔기 즉, 방향족 혹은 곁사슬의 지방족 그룹을 가지는 폴리펩타이드의 C-말단아미노산을 우선적으로 가수분해하는 효소이다. CPA는 구조와 기능과의 연관성 측면에서 잘 연구된 효소중의 하나로 알려져 있다. 한편, 소의 CPA는 두 가지의 알로형으로 췌장에 거의 같은 비율로 존재하고 있으며, 한 형태는 아미노산 서열 179, 228 및 305번 위치에 이소루이신, 알라닌 및 발린을 가지며, 다른 한 형태는 같은 위치에 발린, 글루탐산 및 루이신을 가지는 것으로 밝혀졌다. 전기 아미노산의 차이로 인하여 크로마토그래피에 의한 분리 양상 및 열에 대한 안정성이 다른 것으로 추측된다. 본 기술에서는 소의 췌장조직으로부터 mRNA를 분리하고 역전사효소를 이용한 중합효소 연쇄 반응으로 preproCPA 유전자를 증폭하고, 증폭된 DNA 단편을 pBluescript SK(-)의 SmaI 부위로 삽입하여 재조합 플라스미드를 제조하였다. 또, 신규한 preproCPA 유전자의 뉴클레오티드 서열을 EooRI 제한효소로 절단하여 preproCPA 유전자를 분리하고 이를 BamHI 및 EooRI 제한효소로 절단된 배큘로바이러스 전이백터 pVL1393에 삽입하여 재조합 발현벡터 Pvl1393/ppCPA를 제조한 다음, 이 재조합 바이러스로 곤충세포 Sf9을 감염시키고 배양하여 수득한 세포배양액에 발현된 proCPA가 존재함을 웨스턴 블럿 분석으로 확인하였다. 제조된 CPA는 이를 단백질 분해에 사용하거나 또는 효소 반응을 조절하여 특이한 기질로부터의 펩타이드합성에 이용할 수 있다
- 보유기관
- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-16
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일반기술
생명과학 > 식물자원
한국형 페퍼 마일드 모틀 바이러스(PMMV; pepper mild mottle virus)의 게놈 RNA로부터 클로닝된 54-kDa 복제효소 유전자 및 이를 포함하는 발현 벡터로서 고추에 심각한 폐해를 끼치는 것으로 알려진 담배모자이크바이러스-p(TMV-p)의 54-kDa 복제효소 유전자를 클로닝하여 이를 식물에 도입함으로써 바이러스 저항성을 가지는 고추 또는 다른 작물을 개발하여 한국형 PMMV에 저항성을 가지는 작물, 특히 저항성 고추를 개발하는데 사용할 수 있는 PMMV의 54-kDa 복제효소 유전자와, 이 유전자를 이용하여 식물세포를 형질전환시키는데 사용되는 재조합 발현 벡터를 제공한다. 유전 정보가 아직 알려져 있지 않은 TMV-p로부터 전체 게놈(genome) RNA를 분리하여, 랜덤 헥사머 및 역전사효소를 이용하여 cDNA을 합성하고 염기서열을 확인한 다음, 형질전환된 아그로박테리움을 사용하여 아그로박테리움 매개 형질전환 방법에 따라 식물세포를 형질전환시킨 후 조직배양 방법으로 배양하여 완전한 식물체로 성장시키는 방법이다. 본 기술에 의해 작물을 형질전환시켜 식물세포내에 복제효소 유전자 일부를 발현하는 작물을 제조함으로써 항바이러스성 고추 등의 신품종을 획득할 수 있다현재 다양한 작물의 재배 및 생산에 있어서 가장 큰 감수요인의 하나는 바이러스 병해로서 그 피해는 매우 심각하여 국내의 연간 피해액이 수백억원에 이르는 실정이다. 여러 작물들중에서도 특히 고추는 한국의 주요 작물중의 하나로서 바이러스의 감염으로 인해 큰 피해를 입고 있다. 고추의 주된 바이러스 병징은 모자이크와 주름증세로서, 특히 성장기에 가장 심하게 발병을 일으키는 바이러스는 담배 모자이크 바이러스(TMV)인데, 그 발병률은 전체의 89.1%에 달한다. 이외에도 국내에서는 알려지지 않았으나 외국의 경우 페퍼 마일드 모틀 바이러스 등도 심각한 피해를 끼치는 것으로 알려졌다. 이러한 고추의 바이러스성 질병을 타개하기 위해 야생종으로부터 바이러스 저항성 인자를 도입하기 위한 육종이 시도되고 있으나 기존의 품질을 유지하는 바이러스 저항성 고추 품종의 개발은 아직 미비한 상태에 있다.본 기술은 고추에 심각한 폐해를 끼치는 것으로 알려진 TMV-p의 54-kDa 복제효소 유전자를 클로닝하여 TMV-p의 54-kDa 복제효소 유전자의 염기서열을 결정한 결과 TMV-p가 PMMV와 동일함을 밝혀내었고, 이를 이용해 한국형 PMMV에 저항성을 가지는 작물을 개발하는데 사용할 수 있는 PMMV의 54-kDa 복제효소 유전자 및 이 유전자를 포함하는 재조합 발현벡터를 제공한다.이와 같이 유용한 유전자들을 분리하고 이들을 이용하여 효과적으로 작물의 바이러스병을 방제하는 것은, 신품종 개발을 통해 농가소득의 증대에 기여할 수 있다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-15
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
소화기암 특이 항원인 암태아성 항원(CEA; carcinoembryonic antigen)을 인식하는 단클론성 항체 및 그를 코드하는 DNA의 염기 서열로서, CEA만을 특이적으로 인지하여 결합할 수 있는 항체를 개발하여 CEA에 대한 단클론성 항체의 아미노산 서열 및 그를 코드하는 DNA의 염기 서열을 제공하는 것이다. 인체 대장암 세포주 LS 174T로부터 사람 CEA를 순수 분리 정제하고, 이를 생쥐에 주사하여 생쥐를 면역시킨 후, 면역된 생쥐로부터 비장 세포를 분리한 다음 생쥐의 골수종 세포, 예를 들어, Sp2/O-ag14 세포와 융합시켜 배양이 가능한 새로운 융합세포주를 제조한 다음 배양함으로써 소화기암 특이항원인 CEA를 특이적으로 인지하는 단클론성 항체를 대량으로 생산할 수 있는 방법이다. 항CEA 항체 및 그를 코드하는 DNA는 소화기암의 진단 및 치료제의 개발에 널리 이용될 수 있다CEA는 대장암 조직에서 처음으로 분리된 암 관련 항원으로서 여섯 개의 이황화 결합을 가진 단일 폴리펩티드이고, 40-60% 정도의 당질 잔기로 이루어진 분자량 180-200kDa 정도의 당단백질이다. 또한, CEA는 태아의 대장 점막 이외에도 여러 종류의 소화기 암에서 높게 발현되어 범암종성 항원으로 널리 알려져 있고, 한국인에게 높은 빈도로 발생하는 위암에서도 CEA의 발현이 증대되어 있음이 보고된 바 있다.CEA는 초기에 대장 및 직장암의 특이 표지로 추정되었다. 그러나 정상조직에서도 극소량이 발견되었고, 양성암종이나 다른 종류의 악성종양을 지닌 환자의 혈청에도 존재하는 것이 증명되었다. 따라서, 현재 CEA의 정량법은 대장 및 직장암의 검색, 수술전후 CEA 혈청치의 비교에 의한 암의 재발의 발견 등에 널리 쓰이고 있다.본 기술은 CEA 특이적인 단클론성 항체 항CEA 79의 아미노산 서열 및 그를 코드하는 DNA의 염기 서열을 제공하며, 이 항CEA 79 항체의 대장암 세포에 대한 세포 반응성 검사결과, 소화기암 면역요법제 개발에 이용될 수 있을 것으로 판단된다
- 보유기관
- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-20
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일반기술
보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
항바이러스 활성, 특히 인간 면역결핍 바이러스 억제 활성을 갖는 2-이속사졸린 또는 α-히드록시 케토메틸렌 디펩티드 등 입체이성계를 이용한 펩티드 모방체 화합물로서 HIV 프로테아제를 특이적으로 억제함으로써 바이러스 억제활성을 갖으며, HIV 프로테아제의 전이상태 유사체로서 이속사졸린 또는 이속사졸 화합물과, 이속사졸린 또는 이속사졸 환을 환원성 분해시켜 얻은 히드록시 케톤, 디케톤 및 트리올의 비헤테로환 화합물, 그리고 HIV 프로테아제의 구조와 유사한 C2-대칭구조를 갖는 화합물을 제공한다.본 화합물은 HIV 프로테아제를 억제함으로써, HIV 감염으로 발생하는 후천성 면역 결핍증의 치료 및 예방에 사용할 수 있다프로테아제는 특정의 펩티드 결합부위에서 단백질을 분해하는 효소로서, 생물체에서 특정한 프로테아제와 그의 상보적인 프로테아제 억제제는 광범위한 생물학적 기능을 중재 또는 조절한다. 한편, HIV는 에이즈 및 에이즈 증후군을 일으키는 레트로바이러스로서, 숙주의 효소적 기작을 이용하여 새로운 바이러스의 RNA 및 단백질을 만들 수 있다. 이때 생성된 다단백질은 자신의 내부에 있는 프로테아제를 통하여 껍질 단백질과 역전사효소, 인테그라제 등 바이러스 형성에 필요한 효소들로 분해되게 된다. 이러한 분해과정을 담당하는 프로테아제를 억제하면 바이러스의 복제가 중단되는데, 이러한 원리에 기초한 것이 프로테아제 억제제이다. 그러나, 종래 프로테아제 억제제로 알려진 대부분의 약물들은 생물학적 이용률이 낮아 치료제로 사용하기에 유용하지 않다는 단점이 있었다. 본 기술은 보다 향상된 HIV 억제 활성을 갖는 신규한 화합물로서, 알파-히드록시-, 베타-아미노알데히드로부터 알파-히드록시-, 베타-아미노알독심을 제조한 후 니트릴 옥사이드로 부가환화하여 이속사졸린 또는 이속사졸환을 갖는 화합물을 합성하고, 이것의 카르복실 말단을 보충하기 위해 t-부틸아민과 커플링한 다음 억제제 활성과 관련이 깊은 카르보벤질옥시-아스파라긴 또는 카르보벤질옥시-발린을 N-말단 쪽에 도입하여 제조한다. 본 화합물은 보다 향상된 HIV 억제 활성을 갖는 물질로 후천성 면역결핍증(AIDS) 또는 HIV 감염의 치료 및 예방에 유용한 물질이
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- 포항공과대학교
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- 2001-05-11
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
C형 간염바이러스(HCV) 단백질 분해효소의 활성에 의하여 리포터 단백질이 절단되어 활성을 갖도록 만들어진 벡터를 이용한 C형 간염 치료제의 탐색방법 기술이다. 단백질 분해효소의 활성을 저해함으로써, 바이러스에 기인하는 질병중의 하나인 C형 간염을 치료하고, 바이러스의 복제 시스템이나 정제된 단백질 분해효소의 분석시스템을 이용하여 C형 간염 치료제로서 응용될 수 있는 바이러스의 단백질 분해효소 저해제를 탐색하는 방법이다.HCV 단백질 분해효소의 유전자와 리포터 유전자인 분비성의 알칼리성 인산가수분해효소(SEAP) 유전자가 동일한 벡터에 위치하며, HCV 단백질 분해효소의 활성에 의존하여 리포터 단백질이 절단되어 그의 활성을 나타내도록 발현벡터를 제조하고, 이를 포유동물 세포에 전이시켜 배양함으로써 HCV 단백질 분해효소의 저해제를 탐색한다HCV는 비A형, 비B형 간염의 주요 원인으로 , 약 60% 정도의 높은 빈도로 만성간염으로 전이되며, 이 중 20%의 환자에서 간경변증과 간암으로 진전되는 것으로 알려져 있다. HCV에는 두 가지 단백질 분해효소가 존재하는 것으로 알려졌으며, 이 바이러스의 단백질 분해효소는 다단백질의 프로세싱, 바이러스 입자의 성숙 및 바이러스의 숙주 감염에 중요한 역할을 한다.현재 HCV 단백질 분해효소의 저해제 탐색을 위한 효과적인 HCV 복제 시스템이나 정제된 단백질 분해효소의 분석시스템은 아직까지 개발되어 있지 않은 상태이다. 본 기술은 HCV 단백질 분해효소를 코딩하고있는 NS3/NS4A 유전자 부위와 SEAP 유전자를 포함한 발현벡터를 제공하고 있다. 이 발현벡터에서 SEAP 유전자는 HCV의 NS4A/NS4B 절단부위에서 HCV 단백질 분해효소 유전자와 연결되어 있어, 단백질분해효소의 활성이 있을 때만 SEAP의 N-말단 신호서열이 노출되어 SEAP가 분비된다. 따라서, 이 발현벡터로 전이된 포유 동물세포의 배양액에 포함된 SEAP의 활성을 측정함으로써, HCV 단백질 분해효소의 활성을 평가할 수 있다. 본 HCV 단백질 분해효소의 저해제 탐색방법은 민감하고 정량적이며, 간단하고 신속하기 때문에, 이러한 방법으로 선별된 저해제는 HCV의 복제에 필수적인 HCV 단백질 분해효소의 활성을 저해하므로 C형 간염의 치료제로 이용될 수 있
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- 포항공과대학교
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- 2001-06-20
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일반기술
보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
항우울제로서의 활성을 가지고 있을 뿐 아니라, 기존의 항우울제와 함께 사용할 경우 항우울제 효능을 상승시키는 효과를 나타내는 에타베린, 파파베린 등의 이소퀴놀린 화합물에 관한 것으로 L형 전압 의존성 칼슘이온통로에 대하여 칼슘 길항 효과를 가질 뿐 아니라, 베라파밀과 같은 기존의 칼슘 길항제와는 달리 항우울제 효능을 나타내며, 이미프라민과 같은 기존의 항우울제와 병용투여시 상승작용을 나타내므로 더욱 강력하고 탁월한 효능을 나타내었다. 본 이소퀴놀린계 화합물들은 L형 전압의존성 칼슘이온통로를 특이적으로 저해하는 활성을 가지는 칼슘길항제로서 고혈압 및 협심증 치료제로 사용될 수 있다.칼슘길항제는 고혈압, 협심증, 부정맥 등의 치료제로 개발되어 왔으나, 우울증의 치료에도 일부 사용되어 왔다. L형 칼슘길항제로서 특이적 활성을 갖는 에타베린에 대하여 항우울제 시험방법을 실시한 결과 항우울 작용이 있음이 밝혀짐으로써, 에타베린이나 파파베린과 같은 이소퀴놀린 화합물을 우울증의 치료에 사용할 수 있는 가능성이 제시되었다.본 기술의 화합물중 파파베린과 에타베린의 칼슘 길항 작용에 대한 실험결과, 에타베린은 니페디핀과 동일한 칼슘 길항제 활성을 나타내었으며, 에타베린을 처리한 세포에서는 니페디핀이 더 이상 칼슘유입을 억제하지 못함으로써 에타베린은 L형전압 의존성 칼슘 이온 통로에 대해 특이적인 저해효과가 있음을 알 수 있었다. 또, 에타베린을 쥐의 복강내 투여하고 시험한 결과, 에타베린 용량을 20mg/kg까지 증가시켰을 때 뚜렷한 항우울 효과가 나타났다. 더욱이 에타베린을 이미프라민과 같은 기존의 항우울제와 병용투여하였을 경우 매우 양호한 상승효과를 보여주었는데, 이는 베라파밀과 같은 기존의 L형 칼슘 길항제에서는 볼 수 없는 작용이다. 많은 수의 래트에 단독 투여 또는 다른 항우울제와 병용투여하였으나, 어느 경우에도 특별한 부작용이나 독성을 나타내지 않았으며 외관상으로도 아무 이상을 보이지 않았다.
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- 포항공과대학교
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- 2001-06-18
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일반기술
생명과학 > 기타 유전자 공학
129/sv종 생쥐의 포배아로부터 유래된 새로운 배아 간세포주인 H3 배아 간세포주 및 이를 이용하여 유전자이식 생쥐를 제조하는 방법으로서, H3 배아 간세포주는 교미후 3.5일된 129/sv종 생쥐 암컷의 자궁을 절취하여 이로부터 포배아를 회수하여 배양하여 확보한다. 즉, 호르몬으로 인공배란을 유도한 FVB/N 종 암컷으로부터 포배아를 수거하고, 이어서 H3 배아 간세포를 각 포배아의 배강내에 주입하며, 이렇게 처리된 포배아는 다시 교미후 2.5일된 가임신된 숙주 생쥐의 자궁내에 재이식하여 키메라 생쥐를 제조한다.따라서, 보다 우수한 혈통의 포배아에서 우수한 생식세포 분화 능력을 갖는 새로운 배아 간세포를 얻고, 이를 이용하여 보다 우수한 혈통의 유전자이식 생쥐를 제조할 수 있다.배아간세포는 생쥐의 포배아로부터 유래된 세포주로서, 정상적인 염색체 구성을 가지며 생쥐 발생과정 중의 모든 종류의 세포 형태로 분화할 수 있는 잠재 능력, 즉 전분화능(totipotency)을 갖는다는 특성 때문에 포유류 유전학 연구에 있어 중요한 의미를 지닌다. 새로운 배아 간세포주 H3는 간세포 형태를 나타내며 10회 이상의 계대배양에서도 핵형이 일정하게 유지된다. 또한, 기존의 배아간세포는 키메라 제조시 주로 C57BL/6J 혈통의 포배아내에서만 생식세포 분화가 효과적이라고 보고된 반면, 본 기술의 H3 배아간세포는 FVB/N 혈통의 포배 배아와 섞어주어도 우수한 생식세포 분화능력을 나타낸다는 특징이 있다.FVB/N 혈통은 C57BL/6J 혈통에 비해 번식 및 새끼관리 능력이 뛰어나 실험 재료의 손실을 줄일 수 있으며, 인공배란 유도가 C57BL/6J 혈통보다 기술적으로 용이하므로 마리당 4-5배 더 많은 포배아를 얻을 수 있을 뿐 아니라, 이렇게 인공적으로 얻어진 포배아는 배아간세포 숙주로서 질적으로도 우수하다. 게다가 FVB/N 혈통은 백변종으로 배아간세포의 털색 표현형인 쥐색과 쉽게 대비되기 때문에, 출산 직후 안구 색소의 유무로써 키메라 생쥐를 선별할 수 있다는 장점도 있다. 또한, H3 배아 간세포주는 키메라 제조에 있어 보다 우수한 혈통의 숙주 포배아내에서 생식세포 분화 능력이 뛰어나 유전자이식 기술에 유용하게 이용될 수 있으며, 종래의 방법에 비해 물자, 노력, 시간, 비용 등을 절감시킬 수 있어 기술적 경쟁력을 확보할 수 있다.
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- 포항공과대학교
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- 2001-05-11
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
초임계 유체 추출법으로서, 목적 물질을 포함하는 추출물중 목적 물질에 비해 극성인 성분들을 초임계 유체인 이산화탄소에 비교적 잘 용해되지 않은 성질을 이용하여 선택적으로 제거해주고, 비극성 물질인 지질 계열의 화합물들은 전처리 공정인 흡착 공정을 통해 흡착제에 상대적으로 친수성인 물질들을 흡착시키고 지질 물질과 같은 소수성 물질들만의 접촉 기회를 증가시켜, 소수성 친화력에 의해 서로 응집되어 석출되도록 함으로써, 흡착 공정을 통해 지질 계열의 화합물을 미리 제거하여 식물체 대사 물질을 추출한다.식물체 대사 물질의 초임계 유체 추출시 전처리 공정으로 흡착 공정을 추가하여 대상물질 외에 다른 물질들을 미리 제거함으로써 수율 및 선택도를 향상시켜 목적하는 식물체 대사 물질을 보다 효과적으로 추출할 수 있다.유용하게 사용되는 대표적인 식물체의 대사 물질로는 주목에서 추출되는 항암제인 탁솔, 은행나무에서 추출되는 혈액순환제인 캠페롤 등이 있는데, 현재까지 이들 물질들은 전통적인 용매 추출법에 의해 생산되고 있다. 그러나, 이러한 용매 추출법은 불필요한 물질들까지 모두 추출해 내어 여기에서 미량의 목적물질만을 정제하여야 하기 때문에 많은 시간과 비용이 소요될 뿐만 아니라, 인체에 해로운 유기 용매가 최종 생산물에까지 잔존하는 문제점이 있다.이러한 단점을 개선하기 위한 방법으로 초임계 이산화탄소 및 보조 용매로 에탄올을 사용하여 목적물질을 추출하는 초임계 유체 추출법이 보고되었는데, 종래의 용매 추출법에서의 과다한 유기용매의 사용으로 인한 환경오염 문제는 배제할 수 있었으나 용매 추출법에 비해 수율이 크게 낮은 단점을 나타내었다. 이에 비해 본 기술은 초임계 유체 이산화탄소를 이용한 추출공정에서 문제가 되는 식물체 내의 비극성 물질을 미리 제거해 주기 위해 전처리공정의 일환으로 흡착제를 이용하여 대상물질의 선택적 추출을 도모할 수 있는 신기술로서, 흡착제를 이용한 전처리 공정에서 식물체 내의 지질 계열의 비극성 물질들을 제거해 주고 초임계 유체 추출공정을 통해 극성 물질들을 제외한 대상 물질들만을 선택적으로 추출함으로써 최종 생산물의 선택도와 순도의 향상을 가져올 수 있으며, 경비를 크게 격감시킬 수 있다. 또한 후속의 분리에 소요되는 시간 및 비용을 절감할 수 있어 공정의 경제성을 증대시킬 수 있다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-11
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
피코르나바이러스를 코딩하는 바이러스 유전자와 피코르나바이러스의 전사 해독프레임내에 위치하는 C형 간염바이러스(HCV) 프로테아제 NS3를 코딩하는 프로테아제 유전자와 HCV 프로테아제 NS3의 타겟 부위를 코딩하는 타겟 유전자를 포함하는 C형 간염 대체 바이러스를 코딩하는 재조합 유전자와 이 재조합 유전자에 의하여 발현되는 대체 바이러스의 증식을 억제하는 물질을 검출하는 공정을 포함하는 항C형 간염 바이러스제의 스크리닝 방법 및 이 대체 바이러스를 항C형 간염 바이러스제의 존재하에 증식시키고 증식 능력을 측정하는 공정을 포함하는 항C형 간염 바이러스제의 활성 측정방법이다. 따라서 종래 항C형 간염 바이러스제 개발에 있어서의 문제점을 해결하기 위하여, 조직 배양시스템에서 증식이 잘 일어나며 항C형 간염 바이러스제의 효능을 효과적으로 검정할 수 있는 HCV의 대체바이러스를 제공한다.비A형 간염, 비B형 간염의 주요한 병인자는 HCV로 알려져 있으며 이 바이러스는 간염, 간경변 및 간암 등의 간질환을 일으킨다고 보고되고 있다. HCV에 대한 항바이러스제를 개발하기 위해서는 항바이러스 효과를 나타내는 물질을 찾아내거나, 항바이러스제의 효능을 검정할 수 있는 시스템이 필요한데, HCV를 직접 사용하여 항C형 간염 바이러스제를 스크리닝하거나 항바이러스 효능을 검정하는 것은 매우 어렵기 때문에, 항바이러스제의 효능을 테스트하기 위해서는 HCV의 특징적인 면을 나타내는 대체 바이러스의 개발이 시급하다.본 기술에서는 HCV와 소아마비 바이러스의 특성에 기초하여 HCV 프로테아제의 활성이 있을 때에만 살 수 있는 유전자 재조합 소아마비 바이러스를 생산하였다. 재조합 바이러스에 있어서 증식 및 다른 세포의 감염에 필요한 단백질들은 소아마비 바이러스의 유전자에 의하여 만들어지며 여기에 HCV의 프로테아제와 그 프로테아제가 자르는 부위를 소아마비 바이러스의 유전자 앞에 첨가하여, HCV 프로테아제의 활성이 있을 때에만 이 재조합 바이러스가 증식할 수 있게 구성하였다. 재조합 바이러스를 이용하면 프로테아제 저해제를 기초로 하는 항C형 간염 바이러스제의 개발을 쉽고 정확하게 수행할 수 있다. 본 재조합 바이러스는 항C형 간염 바이러스제의 개발과 효과적인 효능검정에 유용하게 이용될 수 있다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-19
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
그레이브스 질환에 특이적 자가면역항체에 억제작용이 있는 펩티드로서, 갑상선 자극 호르몬 수용체에 결합하는 펩티드를 라이브러리로부터 선별하고 이 펩티드가 그레이브스 질환 환자에서 갑상선 자극 호르몬에 의한 갑상선 호르몬의 합성에는 영향을 미치지 않으면서 갑상선 자극 호르몬 수용체에 대한 자가면역항체가 갑상선 자극 호르몬 수용체에 결합하는 것을 경쟁적으로 억제하여 결국 자가면역항체에 의한 갑상선 호르몬 합성을 억제하는 펩티드EXFDDA이다.본 기술의 펩티드는 그레이브스 환자 50%에 대하여 효과가 있는 것으로 나타났으며, 갑상선 자극 호르몬에 의한 갑상선 호르몬의 합성에는 영향을 미치지 않으면서, 자가면역항체에 의한 갑상선 호르몬의 합성을 억제할 수 있으므로, 그레이브스 질환의 진단시약 및 치료제 개발에 매우 유용할 것으로 판단된다정상적인 인간의 갑상선 호르몬은 자극 호르몬에 의하여 그 합성이 조절되는데, 그레이브스 질환은 이러한 조절없이 계속적으로 갑상선 호르몬을 합성하여 계속적으로 갑상선 기능이 항진되는 질환으로, 이는 그레이브스 질환의 환자가 갑상선 자극 호르몬 수용체에 대하여 자가면역항체를 가지고 있어 갑상선 자극 호르몬의 작용없이도 일련의 신호전달과정을 거쳐 계속적으로 갑상선 호르몬을 합성하는데서 기인한다.그레이브스 질환의 치료를 위하여 비선별적인 갑상선 기능저하제나 갑상선 조직제거 등의 외과 시술이 병행되고 있으나, 비선별적 갑상선 기능저하제를 사용할 경우 재발의 우려가 높으며 갑상선 조직을 제거할 경우는 지속적으로 갑상선 호르몬을 투여하여야 하고 비정상적인 신체 항상성을 가진다는 문제가 있다.이에 그레이브스 질환의 원인인 자가면역성 항체의 한 종류 기능을 억제하는 짧은 단백질 서열을 발견하여 이를 자가면역항체의 억제 펩티드로 이용함으로써, 기존의 방법들의 문제점을 극복하면서 보다 근본적으로 그레이브스 질환을 치료제를 개발하였다. 갑상선 자극 호르몬 수용체의 세포바깥부분인 1번에서 413번까지의 아미노산 서열을 대량으로 발현하고, 이를 항원으로 사용하고, 그레이브스 질환 환자의 면역글로블린 G를 첫번째 항체로 사용하여 그레이브스 질환 환자의 자가면역항체를 확인하는 ELISA 방법을 확립하였으며, 생화학적인 측면 및 임상실험을 통해 자가면역항체의 억제 효능을 검정하여 그레이브스 질환에 효과가 있음을 확인하였
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-11
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일반기술
환경 > 수질오염제어·관리 기술
짧은 공탑 체류시간(empty bed contact time)동안 호기성 조건을 유지시키면서 유기물질과 암모니아성질소의 제거효율을 향상시킨 수처리용 반응기 및 이를 이용한 수처리 방법으로 반응기내에 미생물이 고정화된 담체가 다층으로 분리되어 충진된 반응기를 개발하여 이 반응기의 다수의 층에 원수를 단계적으로 주입함으로써 기존의 생물학적 처리방법보다 제거물질의 처리효율이 향상된 처리방법을 제공하는 것이다. 반응기내에 미생물이 고정화된 담체로 이루어진 생물학적 충진층을 2이상으로 분리 배치하고, 수처리용 반응기 및 처리되어야 할 원수를 상기 반응기의 2이상의 충진층에 분산 주입시켜 처리한다. 본 기술에 의하면 기존의 생물학적 처리방법보다 유기물질 및 암모니아성 질소의 제거에 있어서, 처리효율을 높일 수 있어 수처리 시설에서의 많은 응용이 기대된다미생물을 이용한 음용수 및 폐수처리는 반응기의 운전조건에 따라 아주 민감하므로 용존산소량, 제거물질 및 pH를 최적의 조건으로 유지시켜야 한다. 일반적인 호기성 조건하의 미생물에 의한 유기물질의 산화공정과 질화공정이 제대로 이루어지기 위해서는 많은 양의 용존산소가 필요하다. 그러나 기존의 생물학적 활성탄 처리방법에서는 반응기내에 일체형으로 충진된 담체의 상층에서 용존산소의 대부분이 사용되므로 하층으로 내려갈수록 유기물의 산화와 질산화 반응에 필요한 용존산소량이 감소하게 되어 미생물의 활성저하 및 미생물 개체수의 급격한 감소가 일어나 처리효율이 크게 감소하게 된다. 이에 비해 본 기술의 생물학적 반응기는 다수의 충진층을 포함하고 있어서 각 층마다 담체의 종류를 다르게 할 수 있으며, 특정물질을 제거하고자 할 때 이에 우수한 성능을 보이는 담체를 선택하여 부분적으로 상층부에 충진함으로써 처리효과를 더욱 높일 수 있다. 또한 용존산소량이 충분한 원수를 최상부의 충진층뿐만 아니라 그 하부의 다수의 층에 분산시켜 주입함으로써 하부 충진층에서의 용존산소량을 증가시켜 준다. 특히 처리될 오염물을 과다하게 포함하고 있는 과부하 원수의 경우, 하부 충진층에 주입되는 원수는 일단 상부층에서 정제된 원수와 합쳐져서 오염물질인 유기물의 농도가 희석되는 결과, 미생물의 처리능력을 안정적으로 유지한다. 또한 역세(backwashing)가 부분적으로 나누어 이루어지기 때문에 같은 유량을 이용할지라도 팽창률이 더욱 증가하여 역세에 필요한 펌프운전비 및 물의 사용량을 줄일 수 있다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-15
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일반기술
생명과학 > 기타 생명과학
세포내 신호전달체계에 관여하는 포스포리파아제 C 감마 1(PLC-γ1) 동위효소와 결합하는 단백질 상호간의 결합효율을 엘라이자(ELISA)를 통해 정량적으로 분석할 수 있는 방법에 관한 것으로, 신호 전달과정에서 PLC-γ1과 결합하는 단백질 상호간의 결합 효소 및 이러한 결합에 의해 유발되는 세포내 또는 생체내의 비정상적인 현상, 특히 악성 종양의 발생 등에서의 중요성을 확인하기 위하여, PLC-γ1 동위효소의 SH 영역들을 가지고 효모 하이브리드시스템을 이용하여 두 단백질 상호간의 결합효율을 정량적으로 분석할 수 있는 변형된 ELISA 방법을 제공한다. 즉, PLC-γ1 동위효소로 ELISA 반응 플레이트를 코팅한 후, 글루타티온S 전이효소 결합 형태의 단백질을 상기 코팅된 플레이트에 결합시키고, 항 글루타티온 S 전이효소 항체를 반응시키고, 퍼옥시다제가 결합된 2차 항체를 반응시키고, 효소에 대한 기질을 주입하여 반응시키는 단계로 구성된, PLC-γ1 동위효소와 단백질 상호간 결합효율의 정량적 분석방법이다. 본 기술에 의하면 두 단백질 상호간의 결합정도를 단백질이 변성되지 않은 상태에서 정량적으로 분석할 수 있으며, 적절한 항체만 있으면 간단하고 편리할 뿐 아니라 경제적으로 이용할 수 있다. 또한, 이를 토대로 PLC-γ1 동위효소와 관련된 신호전달체계를 차단할 수 있는 물질을 개발, 확인하여 궁극적으로는 PLC-γ가 관련된 암환자에서 화학적 치료제의 개발에 기여할 수 있을 것으로 기대된다포스포이노시티드에 특이적인 포스포리파아제 C(PLC) 동위효소들은 여러 성장인자들과 세포분열 촉진인자들에 대한 몇몇 초기 세포반응의 하나로서 활성화된다. 그중 PLC-γ는 수용체 티로신 키나아제와 세포내에 있는 티로신 키나아제에 의해 활성화되는데, PLC-γ를 과발현시킨 NIH3T3 세포를 누드 마우스에 이식시켰을 때 종양이 발생하는 것이 관찰되었고, 암조직중 유방암과 결장암에서 PLC-γ가 과발현 되어 있음이 알려졌다. 이러한 PLC-γ1 동위효소와 관련된 신호전달체계 연구와 이 동위효소의 활성을 저해하는 물질의 개발을 위해서는 PLC-γ1 동위효소와 다른 단백질간의 결합 역가를 분석할 필요가 있어서, 본 기술을 개발하게 되었다. 본 기술은 동시면역 침전 반응에서 볼 수 있는 세포내에서의 단백질 상호작용에 대한 정성적인 분석을 넘어서 시험관 내에서의 정량적인 분석이 가능하여, 생체내 또는 세포내 조건에서 하기 어려운 실험들에 대한 대체실험으로도 이용할 수 있다. 즉, 두 단백질간의 상호작용을 촉진 또는 저해시키는 물질을 많은 시료들로부터 탐색하는데 유리하게 이용할 수 있다. 특히 본 기술의 글루타티온 S 전이효소가 결합된 형태의 단백질들을 이용한 분석방법에 있어서는 글루타티온 S 전이효소에 대한 항체를 이용함으로써 원하는 단백질들의 상호작용이 항체에 의해 방해받는 것을 피할 수 있다는 장점도 있다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-16
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일반기술
보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
항진균 활성을 갖는 24-헤테로 원자 치환된 스테로이드 화합물로서 새로운 작용기작을 통하여 강력한 항진균활성을 가지면서도 기존의 약품에서 나타나는 부작용이 거의 없는 화합물이다. 스테로이드계 화합물로서, 24-헤테로 원자 치환된 라노스테롤 화합물들 및 콜레스테롤 화합물들을 제조한 다음, 우수한 항진균 활성을 가지는 화합물을 선별하고, 나아가 물에 대한 용해도가 낮은 결점을 보완하기 위해 하이드로겐설파이트기를 도입하여 수용성을 증진시켰다.본 화합물을 통해 C24위치에 아미노기를 가지는 스테로이드들이 항진균 효과를 가질 수 있다는 것을 증명하였고 그 기작은 에르고스테롤 생합성을 차단하는 것으로 추정된다. 따라서, 본 물질은 새로운 작용기작을 가진 항진균제 개발에 유용하게 사용될 수 있다현재 항진균제로 사용되는 약품으로는 1960년대부터 알려진 폴리엔 계통의 암포테리신 B, 칸디시딘 D, 플루사이토신, 그리고 최근에 개발된 이미다졸 계통의 마이코나졸과 케도코나졸 등이 있다. 그러나 이들 약품은 신장염, 빈혈, 골수염, 현기증, 구토, 약물에 의한 간염 등과 같은 심각한 부작용이 있는 것으로 알려져 있어 사용상 문제가 되고 있다.본 기술의 스테로이드 화합물인 24-아미노라노스테롤, 24-아미노콜레스테롤 및 24-아미노설페이트-콜레스테롤은 기존의 플루코나졸 및 이트라코나졸보다 더 우수한 항진균활성을 나타내었다. 특히, 24-아미노콜레스테롤 및 24-아미노하이드로겐설파이트-콜레스테롤은 시험관내에서 전체 시험균에 대해 24시간 MIC뿐만 아니라 48시간 MIC에서도 대조 화합물인 플루코나졸 및 이트라코나졸보다 강한 항진균 활성을 보였다. 24-아미노콜레스테롤 및 24-아미노설페이트-콜레스테롤의 24시간 및 48시간 MIC값에 차이가 크지 않은 사실에 비추어 이들의 항진균 활성은 정진균(fungistatic) 및 살진균(fungicidal) 효과를 갖는 것으로 사료된다. 반면에 24-아미노라노스테롤은 24시간 및 48시간 MIC 값이 약간의 차이를 나타내는데, 이는 24-아미노라노스테롤의 항진균 활성이 정진균 효과가 강하기 때문인 것으로 보인다
- 보유기관
- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-15
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일반기술
생명과학 > 식물자원
벼, 사과 등의 식물체에서 분리된 개화시기 조절 유전자를 분리하고, 이들을 함유하는 발현 벡터 및 이 발현 벡터로 형질전환시켜 제조된 담배, 페튜니아, 벼 등의 형질전환 식물체에 관한 것으로, 계절에 관계없이 작물의 조기 개화를 유도하여 생육기간을 단축하고 생산량을 증대하는데 유용하게 이용할 수 있는 개화시기 조절 유전자, 이를 함유하는 발현 벡터 및 이로 형질전환된 식물체를 제공한다. 벼의 OsMADS1 cDNA를 탐침으로 하여 벼꽃의 λZapII cDNA 라이브러리를 탐색하여 OsMADS1과 유사한 4개의 개화시기 조절 유전자 OsMADS5, 6, 7 및 8을 분리하였고, 이들과 사과에서 분리된 개화시기 조절유전자 MdMADS3 및 MdMADS4, 이들 각각을 함유하는 발현 벡터를 제조하여 이들 벡터에 의해 형질전환된 담배를 제조하였으며, 또한 OsMADS1을 함유하는 발현 벡터에 의해 형질전환된 페튜니아, 벼, 메릴랜드 메머드 및 니코티아나 실베스트리스 등의 형질전환 식물체를 개발하였다.각 식물은 특정 계절에 꽃이 피며 개화 시기는 식물의 내적 조건인 크기 등에 의해 결정되며, 이외에 광주기, 온도 등 다양한 환경적 요인이 개화시기에 결정적인 영향을 미친다. 이러한 식물의 내적 요인 및 환경적 요인은 개화시기 조절 유전자의 발현을 조절함으로써 이루어지는 것으로 알려져 있으므로, 개화시기 조절 유전자를 분리하여 인위적으로 이의 발현을 조절할 수 있다면 식물의 개화 시기를 조절할 수 있을 것이다. 이에 낙동 벼로부터 OsMADS1이라고 불리는 개화시기 조절 유전자를 분리해내었는데, OsMADS1은 MADS box 유전자류에 속하는 유전자로 상동성이 매우 높은 MADS box및 K box를 가진 조절 유전자이다. OsMADS1 유전자가 발현되도록 형질전환된 식물의 조기 개화 현상 및 왜성 현상은 발현되는 OsMADS1 mRNA의 양에 비례하였으며, 광합성능력 등 다른 생리적 현상은 형질전환체와 형질전환되지 않은 대조군 사이에 별 차이가 없어 OsMADS1 유전자에 의해 생산량은 저하되지 않으면서 개화 시기를 앞당길 수 있어 생육기간이 줄어든 신품종을 육성할 수 있는 가능성을 제시하였다. 본 기술에서 개발된 형질전환체들은 모두 조기 개화 및 왜성 현상을 나타내어, 개화시기 조절 유전자가 쌍자엽 및 단자엽 식물 모두에 작용하여 개화 시기를 조절하며, 개화 시기의 환경인 광주기에 관계없이 개화를 앞당겨 생육기간을 단축시킨다.따라서 계절에 관계없이 식물의 조기 개화 및 현상을 유도하여 생육기간을 단축하고 생산량을 증대할 수 있는 신품종의 육성이 가능하다
- 보유기관
- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-15
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