일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
삼백초로부터 분리정제한 세포접착저해활성을 나타내는테르페노드 화합물인 사우루릭산(saururic acid) 에 관한 기술이다. 삼백초뿌리를 알코올용액에 침지하여 얻은 추출액을 실리카겔 크로마토그래피를 수행하고, 활성이 있는 분획을 메탄올을 용매로 하여 크로마토그래피한 후 HPLC로 용출하여 활성이 있는 사우루릭산 분획을 얻어 이를 생쥐 흑색종세포인 B16-Fl에 투여한결과 강한 세포접착 저해활성을 확인하였다. 신규화합물 사우루릭산은 세포접착 저해작용이 우수하여 암세포가 세포외 매트릭스의 일종인 라미닌에 결합하는 것을 저해하는 작용이 있으므로, 암전이의 예방 및 치료제로 이용될 수 있다.세포접착현상은 세포정보전달, 암, 면역, 신경, 발생, 세포증식, 세포분화, 세포인식 등의 여러 가지 생명현상에 관여하고 있는 것으로 알려졌다. 암세포의 모세혈관 벽의 세포외 기질과의 접착은 세포외 기질 구성성분인 파이브로넥틴, 라미닌, 바이트로넥틴 등에 존재하는 접착에 관여하는 펩타이드와 암세포의 표면에서 발현되는 인테그린과 같은 접착분자의 상호작용에 의해 이루어진다. 최근 이러한 기능을 조절제어하여 암전이를 억제할 수 있는 세포외 매트릭스인 파이브로넥틴, 라미닌, 콜라겐 등에서 유래한 펩타이드가 개발되었는데, 이와 같은 물질들은 혈관내에서 단백질분해효소의 작용에의 분해되는 결점이 있어 새로운 구조의 화합물의 개발이 요구되어 왔다. 이에 세포의 접착을 억제하는 활성이 삼백초의 메탄올 추출물에 존재하는 것을 발견하고 이들 활성성분을 추적한 결과, 신규화합물인 사우루릭산을 분리하였다.라미닌으로 코팅한 마이크로플레이트에 B16-F1 세포현탁액을 첨가하여 사우루릭산의 암세포접착저해활성을 확인한 결과, 세포접착을 50% 저해하는 농도가 4.1 μg/mL인 것으로 나타나, 사우루릭산이 세포접착에 의한 질환의 치료제로서 사용될 수 있음을 보여준다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
B형 간염바이러스(HBV) 표면항원인 S 항원과 프리-S2 항원을 동시에 인식하는 이중특이항체와 그의 유전자, 이 항체를 생산하는 세포주 및 이를 이용하여 간염 항체를 얻는 방법이다. 본 기술은 두 개의 HBV 표면항원에 대한 항체를 이용하여 이들의 항원을 인식하는 영역을 동시에 2개씩 포함하도록 구성된 이중특이 항체를 개발하고, 이들의 HBV 입자에 대한 결합력 등이 기존의 단일클론 항체에 비하여 탁월하게 높아 HBV 입자를 효율적으로 중화시키도록 함으로써 효과적인 간염 예방제 및 치료제를 제공한다. 본 기술은 HBV의 S 항원을 인식하는 부위, 연결 펩타이드, 프리-S2 항원을 인식하는 부위 및 사람 유래의 항체 Fc 부위로 구성되어, 이를 동시에 인식할 수 있는 간염 항체의 유전자를 포함하는 발현 벡터를 제조하고, 이를 중국 햄스터 난소유래(CHO) 세포에 형질전환시킨 다음 메토트렉세이트를 포함하는 배지를 이용하여 간염 항체를 대량 생산하는 세포주를 선별하는 과정으로 이중특이성을 가지는 간염 항체를 제조하여 정제하는 새로운 간염 항체의 제조방법이다. 본 기술에 의하면 상기 이중특이항체는 4가 항체로서 HBV 입자의 프리-S2 항원 또는 S 항원 중의 어느 하나와도 반응하며, 그 결합능이 탁월하여 기존의 단일클론 항체보다도 더 효과적으로 HBV 입자를 면역침강시키므로 더욱 우수한 간염의 예방 및 치료제로서 유용하게 사용될 수 있다HBV는 간염의 주된 병원체인 DNA 바이러스로서, 사람에 침입하여 급성 또는 만성 간염을 일으키는데, 이러한 간염이 악화될 경우 간경화 또는 간암으로 이행된다. HBV 입자는 S 항원, 프리-S1 항원, 프리-S2 항원의 3가지 표면항원을 가지는데, 이들 항원은 바이러스를 중화하는 항체 또는 그 외 보호 항체의 생산을 유도한다. 따라서 상기 표면항원을 이용하여 HBV 감염을 예방하거나 치료하려는 많은 연구들이 시도되어 표면항원에 대한 단일클론 항체 등이 다양하게 생산되었다. 그러나, 아직까지 HBV 감염시에 S 항원 또는 프리-S 항원에 대한 두 가지 이상의 항체를 혼합하여 사용한 연구 또는 상기 두 항원을 함께 인지하는 항체를 이용한 연구는 보고된 바 없었다. 이에 본 기술에서는 B형 간염 바이러스의 다른 두 항원을 동시에 인식하여 효과적으로 바이러스를 중화시킴으로써 간염의 예방 및 치료에 사용될 수 있는 이중특이항체를 개발하였다. 본 기술에의 이중특이항체를 전기영동으로 분석한 결과, 환원된 항체의 분자량은 75kDa이고 환원시키지 않은 항체는 보통의 항체와 분자량이 동일하여 다이머 형태였다. 본 기술의 이중특이항체 TBSIg는 4가(tetravalent)의 항체로서 S 항원과 프리-S2 항원에 모두 결합하는 탁월한 이중특이성을 나타내었다. 또 본 이중특이항체 TBSIg는 HBV 입자와 친화도가 높아 HBV 입자를 면역침강시켰으며, 그 결합능은 대조군에 비해 약 4배정도 더 높게 나타나 매우 효율적인 항체임을 알 수 있었다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-20
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
사람 글루타민 합성효소(GS; glutamine synthase) 유전자를 이용하여 동물세포에서 재조합 단백질을 고수율로 생산하는 방법으로, 메티오닌 설폭시민(MSX; methionine sulfoximin)에 의해 증폭되는 GS 유전자를 이용하여 외래유전자를 대량으로 발현할 수 있는 발현벡터를 제조하고, 이를 이용하여 재조합 에리트로포이에틴(EPO)을 동물세포에서 간편하게 증폭시켜 재조합 EPO 단백질을 생산한다. 상술하면 MSX에 의해 증폭되는 사람 GS 유전자를 이용하여 동물세포 발현벡터를 제작하고, 여기에 EPO 유전자를 삽입한 발현벡터 pcDNA-EPO-dE1-gs를 제작한 후, 외래 유전자를 삽입하여 재조합 단백질을 대량 생산하는데 사용될 수 있는 발현 카세트(cassette)를 포함하는 발현벡터 pcDNA-gs를 제작한 다음, 이 발현벡터를 동물세포(CHO)에 형질전환시키고 MSX 농도를 증가시킨 배지에 배양하여 얻은 세포주를 이용함으로써 EPO를 포함한 유용한 재조합 단백질을 고수율로 생산한다. 본 기술에 의하면 단일 단계의 증폭 과정만으로도 다양한 재조합 단백질을 고수율로 생산하는 세포주를 용이하게 선발할 수 있어, 이로부터 활성이 우수한 재조합 단백질을 효과적으로 생산할 수 있다.EPO는 적혈구 형성자극인자라고도 하는 산성 당단백질 호르몬으로서 EPO를 생산하지 못하는 빈혈증을 치료하는데 사용되고 있으며, 류마티스성 관절염 환자 또는 암 환자에서의 빈혈증 치료, 수술전후의 수혈 대체 등에 이용되고 있다. 지금까지 EPO는 주로 양의 혈장, 사람의 오줌 및 재생불량성 빈혈 환자의 오줌 등에서 추출되었는데, 이를 치료에 사용하기에는 양이 충분하지 않아 널리 이용되지 못하였다. 따라서 EPO를 유전공학적 방법으로 생산하기 위하여 많은 시도들이 이루어지고 있다. 한편 GS는 모든 세포에 발현되는 효소로서 선택 마커로 사용될 수 있고, 이 효소의 억제제인 MSX을 처리하면 높은 복사본 수로 유전자를 증폭시킬 수 있는 특징이 있다. 본 기술의 발현 벡터는 MSX에 의하여 증폭되는 사람 GS 유전자를 이용함으로써, 발현 벡터로 형질전환된 세포에서 외래 유전자를 단일 단계로 간편하고 효과적으로 증폭시킬 수 있고 이로부터 활성이 우수한 형태의 재조합 단백질, 특히 재조합 EPO을 고수율로 생산할 수 있다. 기존의 Cockette 등이 보고한 TIMP 생산성과 비교하여 3배 이상 효율적인 것으로 나타나, 사람 GS 유전자와 enhancer 부위를 제거한 SV40 프로모터를 포함하는 본 기술의 발현벡터는 CHO 세포에서 유전자를 증폭시키는데 매우 유용함을 알 수 있다. 특히, 본 기술은 기존에 많이 사용하여 온 dhfr 유전자를 이용한 경우보다도 더욱 효율적인 것이다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-05-17
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
동물세포에서 p53 항암 유전자를 선택적으로 발현할 수 있는 발현 벡터 및 이를 인체 암 세포주에 형질전환시켜 암억제관련 유전자, 항암제 등을 탐색하는 용도로 사용한다. 테트라사이클린에 의존하는 프로모터 pCMV*-1의 하류에 p53 항암 유전자를 포함하고, 엡스타인바 바이러스 복제기점을 포함하며, 선택 마커로 네오마이신에 대한 내성 유전자를 포함하는 발현 벡터 pDS1293과 엡스타인바 바이러스 복제기점에 작용하는 EBNA-1 단백질의 유전자를 포함하고, 선택마커로 하이그로마이신 B에 대한 내성 유전자를 포함하는 발현 벡터 pETH를 제조하고, 이 발현 벡터 pDS1293 및 pETH를 순차적으로 인체 방광암 세포주에 형질전환시켜 테트라사이클린을 함유하는 배양액에서 p53 항암 유전자를 선택적으로 발현하는 암 세포주 EJ-p53-4를 선별하였다. 인체 암 세포주는 테트라사이클린에 의존하여 p53 항암 유전자를 효과적으로 발현시키므로 p53 유전자에 의하여 조절되는 암억제 관련 유용 유전자 및 새로운 항암제의 탐색에 널리 사용될 수 있다p53 유전자는 항암 유전자로서, 50-60%의 암 환자의 경우 이 유전자에 돌연변이 또는 결손이 일어나 p53 단백질이 제대로 된 활성을 나타내지 못하여 암이 유발되는 것으로 보고되어 있다. 또, p53 항암 유전자의 기능을 상실하고 있는 암세포를 정상 p53 항암 유전자로 형질전환시키면 형질전환된 암세포는 사멸되거나 암증식이 중단된다, 이러한 p53 항암 유전자 및 그 단백질의 유용성이 널리 알려져 전세계적으로 p53 항암 단백질을 이용한 항암 유전자 요법 및 새로운 항암제 등의 개발이 시도되고 있다. 이에 p53 항암 유전자를 선택적으로 발현하여 새로운 항암 표적인자 및 항암제 등을 탐색하는데 유용하게 사용될 수 있는 인체 암 세포주를 제공한다.발현 벡터는 p53 항암 유전자가 고효율로 세포 내에 도입되게 하는 엡스테인바 바이러스의 복제기점 및 선택 마커로 네오마이신에 대한 내성 유전자를 가지고 있으며, p53 항암 유전자를 선택적으로 발현하는 암 세포주의 형태를 테트라사이클린이 포함된 배양액 등에 각각 2주일 동안 배양한 다음 김사 용액으로 세포를 염색하여 현미경으로 관찰하여 본 기술의 암세포주를 선별하였고, 웨스턴 블럿을 수행하여 p53 유전자의 선택적인 발현을 확인하였다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-05-17
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일반기술
보건·의료 > 임상시험·진단관련
생쥐 유래의 퍼옥시리독신을 코딩하고 있는 게놈 DNA상의 유전자 염기 서열에 관한 기술이다.생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터(promoter), Prx Ⅱ-2, Prx Ⅱ-3의 염기서열 및 이들의 구조를 분석함으로써, 이들 퍼옥시리독신 발현효율의 조절뿐만 아니라 퍼옥시리독신이 결여된 질환을 갖는 동물모델을 개발하는데 이용하고자 하는 것이다. 본 기술은 생쥐 스트레인 129로부터 Prx II 유전자를 스크리닝하여 그 유전자 전사를 확인하고, Prx Ⅱ 유전자함유 플라스미드 DNA 벡터를 제조한 다음, 세 가지 형태의 게놈 Prx Ⅱ(Prx Ⅱ-1, Prx Ⅱ-2, Prx Ⅱ-3)를 분리하여 각 유전자의 DNA 염기서열을 결정하고 그 구조를 분석하는 방법이다.퍼옥시리독신은 활성산소를 제거하는 효소단백질로서, 퍼옥시리독신 유전자의 하나인 Prx Ⅱ에 대해 생쥐의 뇌로부터 cDNA가 보고된 바 있는데, 이들 퍼옥시리독신의 발현효율을 높이거나 Prx가 결여된 질환을 갖는 모델동물을 개발하기에는 cDNA의 발현효율이 낮고 Prx 결손 모델동물제작에는 게놈 DNA의 사용이 절대적으로 요구된다는 점 때문에 기술적으로 바람직하지 않았다. 따라서, 게놈 DNA의 염기서열 및 이들의 분리가 절실히 요구되고 있어 생쥐 유래 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터, Prx Ⅱ-2 및Prx Ⅱ-3의 염기서열을 제공한다. 본 기술에서의 Prx Ⅱ-1의 전사단위는 4.5kb 크기로서, 6개의 엑손과 5개의 인트론으로 구성되는데, 6개의 엑손으로부터 198 아미노산을 암호화하는 1.1 kb의 mRNA가 제조된다. 또, Prx Ⅱ-1 유전자 프로모터가 존재하는 810bp의 염기서열에는, 가까운 부위에는 Sp1, NF1, AP-1또는 AP-2 결합부위가, 먼 부위에는 반쪽의 열충격전사인자(HSF) 결합부위가 17개 이상 분포되어 있다. Prx Ⅱ-2는 약 940bp 크기의 단일 엑손으로, 597 bp의 ORF를 유지하고 있으며, Prx Ⅱ-3은 약 750bp 크기로써 Prx Ⅱ-2와 비교하여 191 bp가 손실된 단일 엑손으로, 453bp의 ORF를 갖고 있다. 그러나, Prx Ⅱ-2와 Prx Ⅱ-3 유전자는 mRNA로 전사된다는 증거를 발견하지 못하였으며, 이로써 레트로트랜스포지션에 의한 유사유전자로 여겨진다. 본 기술에 의해 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터, Prx Ⅱ-2, Prx Ⅱ-3의 염기서열을 규명함으로써, 퍼옥시리독신 발현효율을 적절히 조절할 수 있을 뿐만 아니라 퍼옥시리독신이 결여된 질환을 갖는 모델동물을 개발할 수 있어 산업상 유용한 효과가 있다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
사람 파필로마바이러스(HPV) 16형 E6 단백질의 전사활성능에 의한 암화능을 억제하는 항암제의 효능 검색방법 및 스크리닝 방법에 관한 것으로, 특히 자궁경부암을 유발하는 HPV 16형 E6 단백질의 전사활성능을 검색하는 프로모터 활성 검색용 pRSV-luc 플라스미드가 도입된 SiHa/pRSV-luc 세포주에 항암제를 처리한 후 HPV 16형 E6단백질의 전사활성능을 검색함으로써 항암제의 기능 검색방법 및 스크리닝 방법이다. 즉, HPV 16형 E6 단백질에 의해 활성화되는 프로모터 유전자를 4종의 바이러스인 RSV, SV40, HIV, CMV으로부터 얻고, 이 프로모터 유전자와 리포터 유전자로 루시퍼라제 단백질을 암호화하는 유전자를 연결하여 4종의 플라스미드를 제조한 후, 자궁경부암 세포주 SiHa세포에 도입하여 안정한 세포주 SiHa/pRSV-luc 세포주를 제조하고 이 세포주에 여러 종의 항암제를 처리하여 HPV 16형 E6의 발현을 검색함으로써 자궁경부암에 대한 항암제의 효능을 검색하는 방법이다.이 세포주를 항암제로 처리한 후 HPV 16형 E6 단백질의 발현여부만을 검색하는 간단한 공정으로 자궁경부암에 대한 항암제의 치료 효능을 검색하고 나아가 이 세포주를 이용하여 자궁경부암 등의 항암제 스크리닝 방법을 제공할 수 있다자궁경부암은 자궁암의 90%이상을 차지하고 한국 여성에서 발생 및 사망빈도가 가장 높은 악성종양이다. 한편, HPV 16형과 18형은 남녀 생식기, 구강, 피부 등에서 악성종양과 관련되고 특히 여성자궁암의 90% 이상을 차지하는 자궁경부암을 일으키는 주요인자로 작용하는 것으로 밝혀졌으며, HPV 16형과 18형 관련 암 발생에 중추적인 역할을 할 것으로 예상되는 유전자는 E6과 E7로서, 최근 E6 단백질은 암억제 단백질 등과의 결합하는 기능 이외에 여러 유전자의 프로모터 전사활성능을 증가 또는 억제하는 기능이 알려지고 있다. 따라서 이 E6 단백질의 전사활성능과 암화 기전은 HPV에 의한 발암기작 연구 및 효과적인 자궁경부암 항암치료제를 개발하는데 있어 매우 중요하다고 할 수 있다. 이에 HPV 16형E6 단백질의 암화능과 관련된 전사활성능을 분석할 수 있는 pRSV-luc 플라스미드를 선별하고 자궁경부암 세포주인 SiHa에 이입시켜 전사활성이 증가되는 안정한 세포주 SiHa/pRSV-luc를 얻었다. 항암제인 카보플라틴, 마이토마이신 C, 시스플라틴을 처리한 후 전사활성능의 변화를 검색한 결과, 세 항암제 모두가 pRSV-luc 전사만을 일관성있게 억제하였으며, 또 E6의 발현에 미치는 항암제의 영향을 검색한 결과 상기 세 항암제 모두 E6의 발현을 억제하는 것으로 나타나, 본 기술이 매우 뛰어난 자궁경부암 항암제 효능검색 및 스크리닝 방법임을 알 수 있다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
인간 알파s1 카제인을 발현시키는 플라스미드를 제조하고, 이 플라스미드를 대장균에 형질전환시킨 후 형질전환체로부터 모유의 주단백질인 카제인 중의 하나인 인간 알파s1 카제인의 재조합 단백질을 수득한다. 사람 유선 cDNA 라이브러리로부터 알파s1 카제인 유전자를 분리하여 PCR로 증폭한 후 플라스미드 pET-22b(+)에 클로닝하여 플라스미드 pHαs1C1 및 pHαs1C2를 제작한 다음, 플라스미드로 대장균 BL21(DE3)을 형질전환시키고 이를 배양하여 발현된 재조합 인간 알파s1 카제인 중 pHαs1C2에 의해 발현된 재조합 인간 알파s1 카제인을 고정화 금속친화성 크로마토크래피로 정제한다.카제인은 모유에 함유되어 있는 단백질중 40%를 차지하고, 분해물은 오피오이드, 항혈액응고성, 항고혈압성 및 면역조절기능을 제공한다. 포유류의 젖에 함유되어 있는 카제인은 α, β, κ 형태로 구분되는데, 우유에는 알파형이 50%이상 함유되어 있는 반면, 사람의 경우에는 그 양이 적어 종래에는 알파형이 결여된 것으로 알려져 있었다. 1994년에 사람 모유에 알파s1 카제인이 0.06% 함유되어 있음이 보고된 후, 유전자도 클로닝되었으나 그 기능은 아직까지 보고된 바 없었다. 본 기술의 가장 큰 특징은 인간 알파s1 카제인을 발현시키는 두 가지 플라스미드중 pHα s1C2는, 카르복시 말단에 6개의 히스티딘이 붙은 재조합 인간 알파s1 카제인을 발현시키도록 제작하여, 고정화 금속친화성 칼럼크로마토그래피인 Ni-NTA 칼럼크로마토그래피로 용이하게, 그리고 순수하게 정제된 인간 알파s1 카제인을 얻을 수 있는 뛰어난 효과가 있다는 것이다. 본 기술에 의하면 재조합된 인간 알파s1 카제인을 효율적으로 발현시킬 수 있으므로, 사람 모유의 알파s1 카제인 기능 연구 및 생물의약산업상 매우 유용한 것으로 판단된다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-05-17
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일반기술
보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
신호전달체계에 관여하는 효소들의 억제제 또는 활성인자로서 유용한 D-만노피라노스 화합물에 관한 것으로, 정신질환 치료제로 쓰이는 리튬은 신호전달체계에 관여하는 효소들의 억제 또는 활성에 관련된 것으로 알려지고 있고, 또 리튬은 이노시톨 대사과정에서 포스파타아제를 억제하는 효과가 있다고 보고된 바 있어, 이러한 신호전달체계에 관여하는 효소들의 억제제 또는 활성인자로서 유용한 이노시톨 유사체를 개발하여 질병치료에 사용하고자 하는 것이다.이노시톨 구조의 시클로헥산 골격에서 탄소원자 하나를 산소원자로 치환시킨 만노피라노스 화합물이 기존의 인산화 이노시톨 유사체와는 다른 특이한 효소 활성을 나타낸다는 것을 밝혀내고, D-만노피라노스 화합물과 그의 1-메탄포스포네이트 또는 1-포스페이트에 지방산을 치환시킨 지방산 유도체를 제공한다. 본 화합물에 의한 세포내의 이노시톨-1,4,5-삼인산의 조절은 정신질환치료제 등 약학적인 측면에서 매우 중요할 것으로 기대된다.암세포 성장 저해와 관련된 D-3-디옥시-3-아지도-마이오-이노시톨, 소염효과가 있는 이노시톨-1,2,6-삼인산과 포스포리파제 C의 억제효과가 있는 이노시톨-4-인산-1-포스포네이트의 지방산 화합물 및 천연 이노시톨 인산의 화학적 합성방법 등이 보고되어 있다. 세포막 구성성분의 하나인 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트는 포스포리파제 C 에 의하여 디아실글리세롤(DAG)과 D-마이오-이노시톨-1,4,5-삼인산 등 두 개의 이차전달체로 전화되며, 이때 생성된 D-마이오-이노시톨-1,4,5-삼인산은 세포내의 칼슘의 동적 평형에 관계된다. 즉, 세포내의 이노시톨-1,4,5-삼인산의 조절이 신호전달체계에서 매우 중요할 것으로 기대된다. 본 기술에 따른 인산화 이노시톨 유사체는 기존의 인산화 이노시톨 유사체와는 매우 다른 구조 및 특이한 효소활성을 나타낸다. 즉, 이노시톨 구조의 시클로헥산 골격에서 탄소원자 하나는 산소원자로 치환하여 시클로헥산 고리의 구조를 변화시켰을 뿐만 아니라, 6-위치의 히드록실시를 변화시켰고, 본 화합물은 천연 D-마이오-이노시톨 유사체와는 입체적으로 거울상 이성질체의 구조를 가지며, 생물 활성의 경우 본 화합물중 (1-디옥시-4,6-비스포스포릴-β-D-마노피라노실)메틸포스포네이트는 3-키나아제를 선택적으로 저해하며, 포스파타제에 대한 억제효과도 있다본 화합물들의 생리활성 효과에 대해서는 세포내의 칼슘이온 용출, 여러 가지 이노시톨 관련 효소들의 활성 및 이노시톨 1,4,5-트리스포스페이트 3-키나아제 효소의 활성 등을 측정하여 확인하였다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-17
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보건·의료 > 임상시험·진단관련
콜레스테롤 에스터라제를 특이적으로 인지하여 결합할 수 있는 단세포군 항체 단백질와 이 항체를 분비하는 융합세포주에 관한 것으로, 콜레스테롤의 흡수에 중요한 역할을 하고 있는 효소인 콜레스테롤 에스터라제를 생체 또는 병리학적 시료로부터 간편하고 예민하게 검출 및 정량할 수 있는 수단으로서의 단세포군 항체, 이를 균질로 대량 생산할 수 있는 융합세포주를 이용한 단세포군 항체의 제조방법이다. 소의 췌장으로부터 콜레스테롤 에스터라제를 순수분리 정제하고, 이것으로 생쥐(Balb/c)를 면역시킨 다음, 생쥐의 비장 세포를 분리하여 골수종(myeloma) 세포와 융합시킴으로써, 본 항체를 분비하면서 계속적으로 배양이 가능한 새로운 융합세포주에 관한 것이며 또한 이 세포주를 배양하여 그 배양액으로부터 균질의 항체를 필요한 만큼 대량으로 생산할 수 있게 하는 방법이다. 신규 단세포군 항체는 포유동물의 콜레스테롤 에스터라제에만 특이적으로 반응하는 성질을 가지며, 또한 본 기술에서 얻어진 항체 분비 융합세포주는 균질한 단세포군 항체를 향상 생산할 수 있는 융합된 세포주로서, 의학적인 진단, 연구와 콜레스테롤 대사에 관련된 생리, 병리 등의 연구의 좋은 수단으로 이용될 수 있다.콜레스테롤은 보통 음식중에서는 대부분 콜레스테롤 에스터 형태로 존재하며, 섭취되면 십이지장에서 콜레스테롤 에스터라제에 의해 분배되어 나온 콜레스테롤 형태로 흡수된다. 콜레스테롤 에스터라제는 분자량이 72,000인 폴리펩타이드로서 췌장에만 특이적으로 분포하고 있는 췌장의 아시나 세포내의 성숙된 분비 소포체에만 존재하며 소화에 관여하고 있다. 한편, 췌장의 세포 변화를 초래하는 여러 가지 질병(췌장암, 췌장염 등)의 초기진단에 있어서 췌장에 특이적으로 존재하고 있는 콜레스테롤 에스터라제를 활성 측정이 아닌 효소 자체의 단백질량을 항체를 이용하여 정량하면, 특이성이 높고 예민한 측정 방법을 개발할 수 있는 것으로 판단된다. 현재까지 콜레스테롤 에스터라제에 대한 단세포군 항체가 개발된 바 없으며, 콜레스테롤 에스터라제 자체에 대한 성질과 생리 및 병리적 의미도 규명 초기단계에 있어 본 항체는 임상진단에 있어서만 아니라, 연구의 중요한 수단으로 활용될 수 있다.본 기술에 의해 얻어지는 항체는 소의 콜레스테롤 에스터라제에 대한 생쥐에서 생성된 면역글로불린 G1의 균질한 단백질로서, 췌장으로부터 분리되는 분자량 72,000과 67,000의 콜레스테롤 에스터라제를 모두 인식할 수 있으며, 소뿐만 아니라 포유동물의 콜레스테롤 에스터라제에 특이하게 반응성을 갖는다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-23
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
포스포리파제 C-감마2 동위효소를 특이적으로 인지하여 결합할 수 있는 단클론성 항체 단백질, 이를 분비하는 융합세포주에 관한 것으로, 세포내 신호전달체계에 있어서 중추적 역할을 하는 효소인 포스포리파제 C-감마2를 생체 또는 병리학적 시료로부터 간편하고 민감하게 검출 및 정량할 수 있는 수단으로서의 단클론성 항체와 이를 균질로 대량 생산할 수 있는 융합세포주 및 이들 융합세포주를 이용한 상기 단클론성 항체를 제조하는 방법이다.즉, 사람의 포스포리파제 C-감마2 동위효소를 순수 분리 정제하고, 이것으로 생쥐(Balb/c)를 면역시킨 후, 이들로부터 비장 세포를 분리하여 생쥐의 골수종 세포인 Sp2/0-Ag14 세포와 융합시킴으로써, 단클론성 항체를 분비하면서 계속적으로 세포배양이 가능한 새로운 잡종 세포주를 개발하고, 이 세포주를 배양하여 그 배양액으로부터 균질의 항체를 대량으로 생산하는 방법이다. 본 기술은 포유동물 세포의 생리 활성, 분화 및 성장 조절을 연구하는 기초 생물학 연구의 좋은 수단으로 이용될 수 있을 뿐만 아니라, 단클론성 항체는 포유동물의 포스포리파제 C-감마2 효소에만 특이적으로 반응하는 성질을 갖고 있으므로, 세포내 신호전달체계에 관한 연구에 응용하여, 암 등 관련질병의 기작을 밝히는데 사용될 수 있다포스포리파제 C는 외부의 신호를 받아 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트로부터 디아실글리세롤 및 이노시톨 1,4,5-트리스포스페이트를 생성함으로써, protein kinase C를 활성화시키고 칼슘 이온을 세포질로 방출하게 하는 등 세포내 현상, 특히 신호전달계의 중심 효소이다.이중 포스포리파제 C-감마 동위효소는 세포의 성장과 분화, 호르몬이나 소화 효소의 분비 및 다른 신호전달체계의 조절에 중추적인 역할을 하고 있으며, 이에 따라 포스포리파제 C-감마 동위효소의 역할과 작용기전 등에 관한 연구가 암, 내분비 및 의약품 연구자들의 관심의 대상이 되고 있다. 항체는 다양한 서브타입 특이적인 2차 항체를 사용한 효소면역측정법에서, 사람의 포스포리파제 C-감마2 동위효소에 대해 생쥐에 생성된 면역 글로불린 M이며, 포스포리파제 C 효소중 분자량 145,000의 포스포리파제 C-감마1 동위효소와는 교차 반응성을 나타내지 않으나, 분자량 140,000의 포스포리파제 C-감마2 동위효소는 특이적으로 인지하였다. 즉, 본 항체는 뛰어난 친화력으로 세포내에 극미량으로 존재하는 포스포리파제 C-감마2 동위효소만을 특이적으로 인지할 수 있으며, 더욱이 소뿐만 아니라 모든 포유동물의 포스포리파제 C-감마2 동위효소에 특이적으로 반응하는 특징을 가지고 있
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
신호전달체계에 관여하는 효소들의 활성인자 또는 억제제로 유용한 이노시톨 유도체에 관한 것으로, 미오-이노시톨-1,4-디벤조일-2,3:5,6-디이소프로필리딘을 가수분해시켜 미오-이노시톨-1,4-디벤조에이트를 수득하고, 이 화합물로부터 염기조건에서 벤조일기를 이동시켜 얻은, 여러 위치이성체들의 혼합물을 분리시키고, 각 화합물의 하이드록시기를 인산화 또는 티오인산화하고 벤조일기를 제거함으로써 미오-이노시톨 유도체를 얻는다세포막 구성성분의 하나인 포스파티딜이노시톨-4,5비스포스페이트는 포스포리파제 C에 의해 디아실글리세롤(DAG)과 D-미오-이노시톨-1,4,5-삼인산(IP3)의 두 가지 이차전달자를 형성한다. 이때 생성된 두 가지 이차전달자중 D-미오-이노시톨-1,4,5-삼인산은 세포내 칼슘의 동적 평형에 관계한다. 따라서, 세포내의 이노시톨-1,4,5-삼인산의 조절은 약학적인 측면에 있어서 치료제의 개발과 관련하여 매우 중요한 의미를 갖는다. 현재 정신질환 치료제로 사용되는 리튬도 세포내 이노시톨 농도를 조절함으로써 세포내 칼슘 평형에 관여한다는 점에 기인한 것으로, 리튬은 이노시톨의 대사과정중 포스파타제를 억제하는 효과가 있는 것으로 보고된 바 있다.본 기술은 이러한 세포의 신호전달물질로서 중요한 역할을 하는 Inositol Phosphates와 그 유사체들을 한꺼번에 "아실기의 이동" 현상을 통해 제조할 수 있는 효율적인 기술을 제공한다.따라서 종래의 이노시톨 유도체보다 탁월한 효소활성을 나타낼 수 있는 신규의 다양한 이노시톨 유도체를 단일 출발물질로부터 동시에 생성시킬 수 있으며, 신호전달체계의 효소 활성과 관련되는 질병의 치료 및 예방에 유용하게 사용될 수 있다
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
α-아미노산 또는 그 유도체를 광활성적으로 제조하는 방법으로, 프롤린이나 그 유사체를 키랄보조기로 사용하여, 친전자체 시약과 반응시켜 아미도고리화시킨 후 생성된 물질을 환원시켜 친전자체 기능기를 제거하고 산성조건하에서 가수분해시켜 광활성 α-아미노산을 얻는다.α-아미노산을 제조하기 위해서는 디하이드로아미노산의 수소 첨가반응, 글라이신의 알킬화 반응, α-아미네이션 반응 또는 α-카르복실화 반응 등의 방법이 이론적으로 가능한데, 본 기술은 분자내 α-아미네이션 반응을 이용하여 α-아미노산 또는 이의 유도체를 높은 광학수율로 제조하는 방법을 제공한다.아미노산에는 천연단백질의 성분이 되는 약 20개의 α-아미노산과 단백질의 구성성분이 아닌 약 700여 개의 비단백질성 아미노산이 알려져 있다. 아미노산의 제조에는 발효에 의한 방법, 단백질의 가수분해에 의한 방법, 효소를 이용한 합성방법 유기합성에 의한 방법이 널리 사용되고 있다. 그러나, 효소억제제, 항생제 및 생리활성물질의 선도체 등에는 다양한 구조와 입체성을 가진 아미노산이 필요하므로 유기합성으로 광활성 아미노산을 제조하는 방법이 보다 중요시되고 있다. 광활성 아미노산을 합성적으로 제조하기 위해서는 광활성이 없는 아미노산을 합성한 후 이를 광활성 분해하는 방법과 처음부터 광활성 합성을 수행하는 방법을 이용할 수 있다. 본 기술에서 프롤린이나 그 유사체를 키랄보조기로 사용하여 광활성을 갖는 α-아미노산을 제조하는 방법에 있어서, 최종 화합물의 입체화학은 출발물질중 하나인 프롤린의 α위치의 입체화학에 의존하는 특징이 있다. 고리화반응은 광을 포함하는 촉매의 존재하에서 또는 촉매없이 수행할 수 있으며, 아미도고리화 반응에 의해 생성된 화합물은 그 후 친전자체기를 제거하기 위해 환원되며 그 생성물을 산성 조건하에서 가수분해함으로써 광활성 α-아미노산을 얻을 수 있고, 그 부산물로 얻어진 프롤린은 재사용할 수 있다
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- 2001-05-16
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
높은 활성을 갖는 새로운 C형 간염바이러스(HCV) 프로테아제 및 이에 대한 저해제 탐색 방법으로, 효모를 이용하여 HCV의 프로테아제의 생체내에서의 활성을 측정하고, 효모의 유전자 발현체계를 이용하여 HCV 프로테아제의 저해제를 탐색하는 방법이다.즉, DNA 결합 부위와 전사 활성 부위 사이에 HCV프로테아제와 그 기질 부위를 첨가시킨 인위적인 전사활성인자로 된 융합 단백질, 즉 HCV의 헬리카제 부위가 제거되고, NS3의 아미노 말단(N말단)과 NS4A가 직접 결합되어 있는 융합 단백질 형태로 합성된 높은 활성의 HCV 프로테아제를 제조하고, 상기 융합 단백질을 코딩하는 플라스미드를 이용하여 효모를 형질전환시킨 후, 배지 위에 론(lawn)으로 키워 여기에 여러 가지 프로테아제 저해제를 적용하는 저해제 탐색 방법이다. 본 기술에 의하면 높은 효율의 C형 간염바이러스의 프로테아제 재조합 및 프로테아제 활성조사 시스템이 제공되며, 효모의 전사 메커니즘을 이용한 C형 간염 바이러스의 프로테아제에 대한 저해제 스크리닝 시스템이 제공될 수 있다HCV는 비A 비B형 간염의 주된 원인으로서, 간염을 일으키고, 간경변을 거쳐 결국 간암을 유발하는 것으로 알려졌다. HCV는 게놈이 약 3,000개의 아미노산을 코드화하는 (+)센스 RNA로 구성되어 있고 지질의 막으로 싸여 있을 것으로 추정되고 있다. 이 HCV RNA의 구조 단백질에 해당하는 코어와 E1, E2/NS1의 프로세싱은, 숙주 세포의 소포체막에 있는 시그널라제가 작용해서 이루어지고, 그 외의 비구조 단백질들의 프로세싱에는 HCV가 코드화하고 있는 NS3이 프로티애즈로 작용하는 것으로 추정된다. 본 기술에서는 효모의 GAL4 단백질의 활성화 부분에 세균의 Lex A 단백질을 융합하여 인위적인 전사 인자를 생산하였고, 이 전사 인자의 DNA-결합 부위와 전자 활성화 부위 사이에 HCV 프로테아제와 이 프로테아제에 의하여 잘리는 부위를 코드하는 염기 배열을 넣고 융합 단백질을 만들었다. 리포터유전자로 β-갈락토시데이즈를 가지고 있는데, 이 유전자 앞에는 Lex A 단백질 결합 부위가 있어 혼성 단백질의 결합과 전사 활성화 기능에 의해 β-갈락토시데이즈 유전자의 발현 정도가 결정된다. 이 혼성 단백질을 코딩하는 플라스미드를 이용하여 효모를 형질전환시킨 후에 β-갈락토시데이즈의 활성 정도를 측정하여 HCV 프로테아제의 활성 또는 HCV 프로테아제 저해제의 활성을 알 수 있다.
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- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
소화기암 특이 항원인 암태아성 항원(CEA; carcinoembryonic antigen)을 인식하는 단클론성 항체 및 그를 코드하는 DNA의 염기 서열로서, CEA만을 특이적으로 인지하여 결합할 수 있는 항체를 개발하여 CEA에 대한 단클론성 항체의 아미노산 서열 및 그를 코드하는 DNA의 염기 서열을 제공하는 것이다. 인체 대장암 세포주 LS 174T로부터 사람 CEA를 순수 분리 정제하고, 이를 생쥐에 주사하여 생쥐를 면역시킨 후, 면역된 생쥐로부터 비장 세포를 분리한 다음 생쥐의 골수종 세포, 예를 들어, Sp2/O-ag14 세포와 융합시켜 배양이 가능한 새로운 융합세포주를 제조한 다음 배양함으로써 소화기암 특이항원인 CEA를 특이적으로 인지하는 단클론성 항체를 대량으로 생산할 수 있는 방법이다. 항CEA 항체 및 그를 코드하는 DNA는 소화기암의 진단 및 치료제의 개발에 널리 이용될 수 있다CEA는 대장암 조직에서 처음으로 분리된 암 관련 항원으로서 여섯 개의 이황화 결합을 가진 단일 폴리펩티드이고, 40-60% 정도의 당질 잔기로 이루어진 분자량 180-200kDa 정도의 당단백질이다. 또한, CEA는 태아의 대장 점막 이외에도 여러 종류의 소화기 암에서 높게 발현되어 범암종성 항원으로 널리 알려져 있고, 한국인에게 높은 빈도로 발생하는 위암에서도 CEA의 발현이 증대되어 있음이 보고된 바 있다.CEA는 초기에 대장 및 직장암의 특이 표지로 추정되었다. 그러나 정상조직에서도 극소량이 발견되었고, 양성암종이나 다른 종류의 악성종양을 지닌 환자의 혈청에도 존재하는 것이 증명되었다. 따라서, 현재 CEA의 정량법은 대장 및 직장암의 검색, 수술전후 CEA 혈청치의 비교에 의한 암의 재발의 발견 등에 널리 쓰이고 있다.본 기술은 CEA 특이적인 단클론성 항체 항CEA 79의 아미노산 서열 및 그를 코드하는 DNA의 염기 서열을 제공하며, 이 항CEA 79 항체의 대장암 세포에 대한 세포 반응성 검사결과, 소화기암 면역요법제 개발에 이용될 수 있을 것으로 판단된다
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- 포항공과대학교
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- 2001-06-20
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일반기술
보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
항바이러스 활성, 특히 인간 면역결핍 바이러스 억제 활성을 갖는 2-이속사졸린 또는 α-히드록시 케토메틸렌 디펩티드 등 입체이성계를 이용한 펩티드 모방체 화합물로서 HIV 프로테아제를 특이적으로 억제함으로써 바이러스 억제활성을 갖으며, HIV 프로테아제의 전이상태 유사체로서 이속사졸린 또는 이속사졸 화합물과, 이속사졸린 또는 이속사졸 환을 환원성 분해시켜 얻은 히드록시 케톤, 디케톤 및 트리올의 비헤테로환 화합물, 그리고 HIV 프로테아제의 구조와 유사한 C2-대칭구조를 갖는 화합물을 제공한다.본 화합물은 HIV 프로테아제를 억제함으로써, HIV 감염으로 발생하는 후천성 면역 결핍증의 치료 및 예방에 사용할 수 있다프로테아제는 특정의 펩티드 결합부위에서 단백질을 분해하는 효소로서, 생물체에서 특정한 프로테아제와 그의 상보적인 프로테아제 억제제는 광범위한 생물학적 기능을 중재 또는 조절한다. 한편, HIV는 에이즈 및 에이즈 증후군을 일으키는 레트로바이러스로서, 숙주의 효소적 기작을 이용하여 새로운 바이러스의 RNA 및 단백질을 만들 수 있다. 이때 생성된 다단백질은 자신의 내부에 있는 프로테아제를 통하여 껍질 단백질과 역전사효소, 인테그라제 등 바이러스 형성에 필요한 효소들로 분해되게 된다. 이러한 분해과정을 담당하는 프로테아제를 억제하면 바이러스의 복제가 중단되는데, 이러한 원리에 기초한 것이 프로테아제 억제제이다. 그러나, 종래 프로테아제 억제제로 알려진 대부분의 약물들은 생물학적 이용률이 낮아 치료제로 사용하기에 유용하지 않다는 단점이 있었다. 본 기술은 보다 향상된 HIV 억제 활성을 갖는 신규한 화합물로서, 알파-히드록시-, 베타-아미노알데히드로부터 알파-히드록시-, 베타-아미노알독심을 제조한 후 니트릴 옥사이드로 부가환화하여 이속사졸린 또는 이속사졸환을 갖는 화합물을 합성하고, 이것의 카르복실 말단을 보충하기 위해 t-부틸아민과 커플링한 다음 억제제 활성과 관련이 깊은 카르보벤질옥시-아스파라긴 또는 카르보벤질옥시-발린을 N-말단 쪽에 도입하여 제조한다. 본 화합물은 보다 향상된 HIV 억제 활성을 갖는 물질로 후천성 면역결핍증(AIDS) 또는 HIV 감염의 치료 및 예방에 유용한 물질이
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- 2001-05-11
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
C형 간염바이러스(HCV) 단백질 분해효소의 활성에 의하여 리포터 단백질이 절단되어 활성을 갖도록 만들어진 벡터를 이용한 C형 간염 치료제의 탐색방법 기술이다. 단백질 분해효소의 활성을 저해함으로써, 바이러스에 기인하는 질병중의 하나인 C형 간염을 치료하고, 바이러스의 복제 시스템이나 정제된 단백질 분해효소의 분석시스템을 이용하여 C형 간염 치료제로서 응용될 수 있는 바이러스의 단백질 분해효소 저해제를 탐색하는 방법이다.HCV 단백질 분해효소의 유전자와 리포터 유전자인 분비성의 알칼리성 인산가수분해효소(SEAP) 유전자가 동일한 벡터에 위치하며, HCV 단백질 분해효소의 활성에 의존하여 리포터 단백질이 절단되어 그의 활성을 나타내도록 발현벡터를 제조하고, 이를 포유동물 세포에 전이시켜 배양함으로써 HCV 단백질 분해효소의 저해제를 탐색한다HCV는 비A형, 비B형 간염의 주요 원인으로 , 약 60% 정도의 높은 빈도로 만성간염으로 전이되며, 이 중 20%의 환자에서 간경변증과 간암으로 진전되는 것으로 알려져 있다. HCV에는 두 가지 단백질 분해효소가 존재하는 것으로 알려졌으며, 이 바이러스의 단백질 분해효소는 다단백질의 프로세싱, 바이러스 입자의 성숙 및 바이러스의 숙주 감염에 중요한 역할을 한다.현재 HCV 단백질 분해효소의 저해제 탐색을 위한 효과적인 HCV 복제 시스템이나 정제된 단백질 분해효소의 분석시스템은 아직까지 개발되어 있지 않은 상태이다. 본 기술은 HCV 단백질 분해효소를 코딩하고있는 NS3/NS4A 유전자 부위와 SEAP 유전자를 포함한 발현벡터를 제공하고 있다. 이 발현벡터에서 SEAP 유전자는 HCV의 NS4A/NS4B 절단부위에서 HCV 단백질 분해효소 유전자와 연결되어 있어, 단백질분해효소의 활성이 있을 때만 SEAP의 N-말단 신호서열이 노출되어 SEAP가 분비된다. 따라서, 이 발현벡터로 전이된 포유 동물세포의 배양액에 포함된 SEAP의 활성을 측정함으로써, HCV 단백질 분해효소의 활성을 평가할 수 있다. 본 HCV 단백질 분해효소의 저해제 탐색방법은 민감하고 정량적이며, 간단하고 신속하기 때문에, 이러한 방법으로 선별된 저해제는 HCV의 복제에 필수적인 HCV 단백질 분해효소의 활성을 저해하므로 C형 간염의 치료제로 이용될 수 있
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-20
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일반기술
보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
항우울제로서의 활성을 가지고 있을 뿐 아니라, 기존의 항우울제와 함께 사용할 경우 항우울제 효능을 상승시키는 효과를 나타내는 에타베린, 파파베린 등의 이소퀴놀린 화합물에 관한 것으로 L형 전압 의존성 칼슘이온통로에 대하여 칼슘 길항 효과를 가질 뿐 아니라, 베라파밀과 같은 기존의 칼슘 길항제와는 달리 항우울제 효능을 나타내며, 이미프라민과 같은 기존의 항우울제와 병용투여시 상승작용을 나타내므로 더욱 강력하고 탁월한 효능을 나타내었다. 본 이소퀴놀린계 화합물들은 L형 전압의존성 칼슘이온통로를 특이적으로 저해하는 활성을 가지는 칼슘길항제로서 고혈압 및 협심증 치료제로 사용될 수 있다.칼슘길항제는 고혈압, 협심증, 부정맥 등의 치료제로 개발되어 왔으나, 우울증의 치료에도 일부 사용되어 왔다. L형 칼슘길항제로서 특이적 활성을 갖는 에타베린에 대하여 항우울제 시험방법을 실시한 결과 항우울 작용이 있음이 밝혀짐으로써, 에타베린이나 파파베린과 같은 이소퀴놀린 화합물을 우울증의 치료에 사용할 수 있는 가능성이 제시되었다.본 기술의 화합물중 파파베린과 에타베린의 칼슘 길항 작용에 대한 실험결과, 에타베린은 니페디핀과 동일한 칼슘 길항제 활성을 나타내었으며, 에타베린을 처리한 세포에서는 니페디핀이 더 이상 칼슘유입을 억제하지 못함으로써 에타베린은 L형전압 의존성 칼슘 이온 통로에 대해 특이적인 저해효과가 있음을 알 수 있었다. 또, 에타베린을 쥐의 복강내 투여하고 시험한 결과, 에타베린 용량을 20mg/kg까지 증가시켰을 때 뚜렷한 항우울 효과가 나타났다. 더욱이 에타베린을 이미프라민과 같은 기존의 항우울제와 병용투여하였을 경우 매우 양호한 상승효과를 보여주었는데, 이는 베라파밀과 같은 기존의 L형 칼슘 길항제에서는 볼 수 없는 작용이다. 많은 수의 래트에 단독 투여 또는 다른 항우울제와 병용투여하였으나, 어느 경우에도 특별한 부작용이나 독성을 나타내지 않았으며 외관상으로도 아무 이상을 보이지 않았다.
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-18
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
초임계 유체 추출법으로서, 목적 물질을 포함하는 추출물중 목적 물질에 비해 극성인 성분들을 초임계 유체인 이산화탄소에 비교적 잘 용해되지 않은 성질을 이용하여 선택적으로 제거해주고, 비극성 물질인 지질 계열의 화합물들은 전처리 공정인 흡착 공정을 통해 흡착제에 상대적으로 친수성인 물질들을 흡착시키고 지질 물질과 같은 소수성 물질들만의 접촉 기회를 증가시켜, 소수성 친화력에 의해 서로 응집되어 석출되도록 함으로써, 흡착 공정을 통해 지질 계열의 화합물을 미리 제거하여 식물체 대사 물질을 추출한다.식물체 대사 물질의 초임계 유체 추출시 전처리 공정으로 흡착 공정을 추가하여 대상물질 외에 다른 물질들을 미리 제거함으로써 수율 및 선택도를 향상시켜 목적하는 식물체 대사 물질을 보다 효과적으로 추출할 수 있다.유용하게 사용되는 대표적인 식물체의 대사 물질로는 주목에서 추출되는 항암제인 탁솔, 은행나무에서 추출되는 혈액순환제인 캠페롤 등이 있는데, 현재까지 이들 물질들은 전통적인 용매 추출법에 의해 생산되고 있다. 그러나, 이러한 용매 추출법은 불필요한 물질들까지 모두 추출해 내어 여기에서 미량의 목적물질만을 정제하여야 하기 때문에 많은 시간과 비용이 소요될 뿐만 아니라, 인체에 해로운 유기 용매가 최종 생산물에까지 잔존하는 문제점이 있다.이러한 단점을 개선하기 위한 방법으로 초임계 이산화탄소 및 보조 용매로 에탄올을 사용하여 목적물질을 추출하는 초임계 유체 추출법이 보고되었는데, 종래의 용매 추출법에서의 과다한 유기용매의 사용으로 인한 환경오염 문제는 배제할 수 있었으나 용매 추출법에 비해 수율이 크게 낮은 단점을 나타내었다. 이에 비해 본 기술은 초임계 유체 이산화탄소를 이용한 추출공정에서 문제가 되는 식물체 내의 비극성 물질을 미리 제거해 주기 위해 전처리공정의 일환으로 흡착제를 이용하여 대상물질의 선택적 추출을 도모할 수 있는 신기술로서, 흡착제를 이용한 전처리 공정에서 식물체 내의 지질 계열의 비극성 물질들을 제거해 주고 초임계 유체 추출공정을 통해 극성 물질들을 제외한 대상 물질들만을 선택적으로 추출함으로써 최종 생산물의 선택도와 순도의 향상을 가져올 수 있으며, 경비를 크게 격감시킬 수 있다. 또한 후속의 분리에 소요되는 시간 및 비용을 절감할 수 있어 공정의 경제성을 증대시킬 수 있다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-11
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
피코르나바이러스를 코딩하는 바이러스 유전자와 피코르나바이러스의 전사 해독프레임내에 위치하는 C형 간염바이러스(HCV) 프로테아제 NS3를 코딩하는 프로테아제 유전자와 HCV 프로테아제 NS3의 타겟 부위를 코딩하는 타겟 유전자를 포함하는 C형 간염 대체 바이러스를 코딩하는 재조합 유전자와 이 재조합 유전자에 의하여 발현되는 대체 바이러스의 증식을 억제하는 물질을 검출하는 공정을 포함하는 항C형 간염 바이러스제의 스크리닝 방법 및 이 대체 바이러스를 항C형 간염 바이러스제의 존재하에 증식시키고 증식 능력을 측정하는 공정을 포함하는 항C형 간염 바이러스제의 활성 측정방법이다. 따라서 종래 항C형 간염 바이러스제 개발에 있어서의 문제점을 해결하기 위하여, 조직 배양시스템에서 증식이 잘 일어나며 항C형 간염 바이러스제의 효능을 효과적으로 검정할 수 있는 HCV의 대체바이러스를 제공한다.비A형 간염, 비B형 간염의 주요한 병인자는 HCV로 알려져 있으며 이 바이러스는 간염, 간경변 및 간암 등의 간질환을 일으킨다고 보고되고 있다. HCV에 대한 항바이러스제를 개발하기 위해서는 항바이러스 효과를 나타내는 물질을 찾아내거나, 항바이러스제의 효능을 검정할 수 있는 시스템이 필요한데, HCV를 직접 사용하여 항C형 간염 바이러스제를 스크리닝하거나 항바이러스 효능을 검정하는 것은 매우 어렵기 때문에, 항바이러스제의 효능을 테스트하기 위해서는 HCV의 특징적인 면을 나타내는 대체 바이러스의 개발이 시급하다.본 기술에서는 HCV와 소아마비 바이러스의 특성에 기초하여 HCV 프로테아제의 활성이 있을 때에만 살 수 있는 유전자 재조합 소아마비 바이러스를 생산하였다. 재조합 바이러스에 있어서 증식 및 다른 세포의 감염에 필요한 단백질들은 소아마비 바이러스의 유전자에 의하여 만들어지며 여기에 HCV의 프로테아제와 그 프로테아제가 자르는 부위를 소아마비 바이러스의 유전자 앞에 첨가하여, HCV 프로테아제의 활성이 있을 때에만 이 재조합 바이러스가 증식할 수 있게 구성하였다. 재조합 바이러스를 이용하면 프로테아제 저해제를 기초로 하는 항C형 간염 바이러스제의 개발을 쉽고 정확하게 수행할 수 있다. 본 재조합 바이러스는 항C형 간염 바이러스제의 개발과 효과적인 효능검정에 유용하게 이용될 수 있다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-19
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그레이브스 질환에 특이적 자가면역항체에 억제작용이 있는 펩티드로서, 갑상선 자극 호르몬 수용체에 결합하는 펩티드를 라이브러리로부터 선별하고 이 펩티드가 그레이브스 질환 환자에서 갑상선 자극 호르몬에 의한 갑상선 호르몬의 합성에는 영향을 미치지 않으면서 갑상선 자극 호르몬 수용체에 대한 자가면역항체가 갑상선 자극 호르몬 수용체에 결합하는 것을 경쟁적으로 억제하여 결국 자가면역항체에 의한 갑상선 호르몬 합성을 억제하는 펩티드EXFDDA이다.본 기술의 펩티드는 그레이브스 환자 50%에 대하여 효과가 있는 것으로 나타났으며, 갑상선 자극 호르몬에 의한 갑상선 호르몬의 합성에는 영향을 미치지 않으면서, 자가면역항체에 의한 갑상선 호르몬의 합성을 억제할 수 있으므로, 그레이브스 질환의 진단시약 및 치료제 개발에 매우 유용할 것으로 판단된다정상적인 인간의 갑상선 호르몬은 자극 호르몬에 의하여 그 합성이 조절되는데, 그레이브스 질환은 이러한 조절없이 계속적으로 갑상선 호르몬을 합성하여 계속적으로 갑상선 기능이 항진되는 질환으로, 이는 그레이브스 질환의 환자가 갑상선 자극 호르몬 수용체에 대하여 자가면역항체를 가지고 있어 갑상선 자극 호르몬의 작용없이도 일련의 신호전달과정을 거쳐 계속적으로 갑상선 호르몬을 합성하는데서 기인한다.그레이브스 질환의 치료를 위하여 비선별적인 갑상선 기능저하제나 갑상선 조직제거 등의 외과 시술이 병행되고 있으나, 비선별적 갑상선 기능저하제를 사용할 경우 재발의 우려가 높으며 갑상선 조직을 제거할 경우는 지속적으로 갑상선 호르몬을 투여하여야 하고 비정상적인 신체 항상성을 가진다는 문제가 있다.이에 그레이브스 질환의 원인인 자가면역성 항체의 한 종류 기능을 억제하는 짧은 단백질 서열을 발견하여 이를 자가면역항체의 억제 펩티드로 이용함으로써, 기존의 방법들의 문제점을 극복하면서 보다 근본적으로 그레이브스 질환을 치료제를 개발하였다. 갑상선 자극 호르몬 수용체의 세포바깥부분인 1번에서 413번까지의 아미노산 서열을 대량으로 발현하고, 이를 항원으로 사용하고, 그레이브스 질환 환자의 면역글로블린 G를 첫번째 항체로 사용하여 그레이브스 질환 환자의 자가면역항체를 확인하는 ELISA 방법을 확립하였으며, 생화학적인 측면 및 임상실험을 통해 자가면역항체의 억제 효능을 검정하여 그레이브스 질환에 효과가 있음을 확인하였
- 보유기관
- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-11
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