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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
세포탁심과, (1R, 5S, 6S)-2-[(2S,4S)-2-[(E)-3-메탄설포닐아미노-1-프로페닐]피롤로딘-4-일-티오]-6-[(R)-1-히드록시에틸]-1-메틸-1-카바펜-2-엠-3-카르본산(이하 화합물 1) 또는 메로페넴에서 선택된 화합물을 유효성분으로 함유함으로써 높은 상승효과를 가지는 약학적 조성물이다. 세포탁심은 베타 락탐환을 갖고 있는 세팔로스포린계 항생제의 일종이며, 화합물 I과 메로페넴은 베타 락탐환을 갖고 있는 카바페넴계 항생제의 일종으로 병원균에 대해 광범위의 강한 항균활성을 나타낸다. 본 기술에서는 화합물 I과 메로페넴의 베타 락타마제 저해 활성을 이용하여, 세포탁심과 소량의 화합물 I 또는 메로페넴을 병용함으로써, 세포탁심 내성인 베타 락타마제 생산균주에 대한 세포탁심의 항균활성을 탁월하게 개선하였으며, 더욱이 항녹농균 활성도향상시키는 결과를 보였다. 특히, 화합물 I 혹은 메로페넴의 농도가 MIC의 1/4 이하에서 세포탁심의 항균력이 약 30-200배 이상 개선되었으므로 화합물 I 혹은 메로페넴과 세포탁심의 병용시 항균력 개선이 화합물 I과 메로페넴 자체의 항균력의 영향을 받지 않았다. 따라서, 본 기술은 베타 락타마제를 생산하는 그람양성균 및 음성균을 포함한 광범위한 세균감염증의 예방 및 치료를 위하여 효과적으로 이용될 수 있다베타 락탐계 항생물질은 항균작용의 본질이 살균적 작용이며, 동시에 살균기전이 세균에만 독특하게 나타나 안전성을 확보하고 있는 것으로 알려져 있으므로 현재도 세균감염을 퇴치하는데 베타 락탐 항생물질인 페니실린 및 세팔로스포린류가 광범위하게 사용되고 있다. 세포탁심은 베타 락탐환을 갖고 있는 세팔로스포린계 항생제의 일종으로, 황색포도상구균을 포함한 그람양성균 및 그람음성균에 대하여 광범위의 강한 항균활성을 나타낸다. 그러나, 세프타지딤을 제외한 대부분의 제3세대 세팔로스포린계 항생제와 마찬가지로 세포탁심은 녹농균에 대하여 항균활성을 나타내지 못하며, 베타 락타마제에 의하여 항균활성이 크게 저하된다는 결점을 갖고 있다. 한편, 화합물 I과 메로페넴은 베타 락탐환을 갖고 있는 카바페넴계 항생제의 일종으로 그 자체적으로도 항녹농균활성을 포함한 강한 항균력을 가지고 있는데, 본 기술에 의해 베타 락타마제에 대하여 강한 친화성을 가지고 있으며, 이 효소와 결합하여 그 활성을 억제한다는 사실이 밝혀졌다. 이에 본 기술에서는 화합물 I과 메로페넴의 베타 락타마제 저해 활성을 이용한 연구를 수행한 결과, 소량의 화합물 I 또는 메로페넴과 세포탁심의 병용에 의하여 세포탁심 내성인 베타 락타마제 생산균주에 대한 세포탁심의 항균활성이 탁월한 상승효과를 나타낼 뿐 아니라 항녹농균 활성도 개선되는 효과가 있음을 보여주며, 세포탁심의 항녹농균활성과 베타 락타마제 안정성이 개선된 신규의 상승효과를 가지는 화합물 I 혹은 메로페넴과, 세포탁심을 함유하는 약학적 조성물을 제공하고 있다
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- 2001-06-20
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
우르소데옥시콜린산(이하 UDCA)을 함유하는 투명연질캅셀제 및 UDCA와 비타민 등과 같은 기타 유효성분을 함유하는 투명연질캅셀제제 및 이의 제조방법에 관한 기술이다. UDCA은 그 용해성이 매우 낮기 때문에 UDCA 및 이 성분과 기타 유효성분을 함유하는 연질캅셀은 지금까지 개발되어 있지 않았다. 이에 본 기술은, 연질캅셀제조시 일반적으로 많이 사용하는 콩기름, 옥수수기름 등의 성분으로서, 우수한 가용화 능력과 물과 거의 섞이지 않는 성질을 가지고 있으며, 인체에 아무런 영향을 미치지 않는 등 여러 가지 연질캅셀의 내용물 부형제로 사용가능한 불포화 지방산인 올레인산, 리놀레인산, 리놀레닌산 등을 이용하여 UDCA와 여러 가지 비타민들을 함유하는 투명연질캅셀을 만드는 방법이다. 또한, 본 기술에서는 상기 방법으로 제조한 투명연질캅셀이 물리적, 화학적으로 안정한 제제임을 입증하였다. 이렇게 제조된 투명연질캅셀제는 연질캅셀의 내용물이 액체상태이므로 젤라틴셀에 충진하기가 용이하고, 현탁액과 같은 침전현상이 없어 안정성이 뛰어나며 캅셀들의 함량 균일성 유지가 용이할 뿐만 아니라, 투명한 연질캅셀안에 액체상태의 약물을 충진하여 투여 후 신속히 용출, 흡수되어 높은 혈중농도를 나타내므로 고형제제보다 더욱 빠른 효과를 기대할 수 있으며, 내부를 관찰할 수 있는 투명한 연질캅셀이므로 충진된 내용물의 상태와 변질상태를 육안으로도 알 수 있어 상품성이 매우 뛰어나다일반적으로 연질캅셀제의 내용물은 액상, 현탁상으로 되어 있고 젤라틴을 주성분으로 하는 캅셀기제에 충진되어 있다. 연질캅셀은 오미, 오취 또는 착생성이 있는 의약품의 투여에 편리하고 유상, 현탁상 등 복용하기 힘든 의약품을 고형화하고 용량을 일정하게 할 수 있는 특징을 가지고 있다. 연질캅셀은 연질캅셀에 사용할 수 있는 내용물 부형제가 제한되어 있어 캅셀내용물의 가용화가 어렵다는 점과 안정성을 확보할 수 있는 셀조성의 문제 등으로 인해서 약물현탁액이 들어있는 불투명연질캅셀이 대부분이며 투명연질캅셀은 그 수가 매우 미미한 실정이다. 이에 본 기술은 UDCA를 내용물 부형제로서 분자량 600이하의 폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐피롤리돈, 불포화지방산에서 선택된 1종 이상의 부형제에 용해시키고 연질 젤라틴 캅셀에 충진하여 통상의 연질캅셀의 제조방법으로 제조된 UDCA를 함유하는 투명연질캅셀 조성물을 제공한다. 특히, 본 기술에서는 캅셀에 함유되어 있는 주성분을 용해하는 과정에서 열을 가하는 공정이 모두 포함되어 있다. 일반적으로 비타민류들이 열, 빛, 공기 등에 불안정하기 때문에 이는 연질캅셀의 제조공정중 일반적으로 흔히 볼 수 있는 방법이 아니고 본 기술에만 특별하게 사용된 방법이다. 이렇게 제조된 투명연질캅셀에 함유된 주성분들의 경시적인 함량변화를 보면 거의 변화가 없으며, 따라서 제조공정중 열을 가하는 공정에 상관없이 본 기술의 제조방법으로 제조한 투명연질캅셀은 화학적으로 안정한 투명연질캅셀임을 확인할 수 있었다
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- 특허법인충정
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- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
비수용성으로서 코팅성이 우수하여 가소제나 정전기 방지제의 사용없이도 코팅이 용이하며 팽윤에 의하여 약물을 방출하는 폴리머로 약물 함유 핵을 코팅하여 공극이 작고 치밀한 방출제어 필름막을 형성시킨 뒤, 그 외측에 이 막의 팽윤을 억제시킬 수 있는 견고한 필름을 코팅하면 결국 두 막의 장점을 모두 갖는, 즉 막조직이 치밀하고 팽윤도가 낮아 약물투과가 낮은 방출제어막을 얻는다. 본 기술에서는 에틸셀룰로오스를 사용하여 첨가제가 없으므로 균질하고 치밀한 구조를 갖는 1차 방출 제어막을 코팅하고, 그 위에 유드라지트 RS 100(Eudragit RS 100)으로 다시 한 번 코팅함으로써 1차 코팅막의 팽윤을 억제시켜, 적은 코팅량으로도 약물방출을 효과적으로 억제할 수 있는 이중막 시스템(Double Layer System)을 개발하였다.지속성제제는 일반의약품에 비하여 복용이 간편하며, 안정적인 약물의 혈중농도를 유지함으로써 일반의약품 투여시 약의 최고혈중농도가 치료농도역보다 높거나 낮아져서 부작용이 발생하거나 약효가 저하되는 단점을 방지할 수 있는 이점이 있는데, 이들 중 제제로부터의 약물방출을 제어하는 경구투여 지속성제제들이 가장 널리 이용되고 있다. 경구 지속성제제들로부터 원하는 속도로 약물을 방출시키기 위한 방출제어 방법중, 제어 방출막형 지속성제제에 있어서, 충분한 방출제어 효과를 얻을 수 있는 두께의 제어 방출막을 얻기 위해 다량의 폴리머를 코팅해야 하므로 코팅시간, 코팅용매 및 폴리머의 원가, 장시간의 코팅으로 인한 과립간의 뭉침현상 등 경제성이 떨어지고, 코팅량을 증가시키는 경우에는 대부분 서방성의 용출(sustained release)보다는 지연성의 용출(delayed release)을 보이기 때문에 원하는 용출패턴을 얻기 어렵다. 또한, 서방성제제의 방출 제어막으로 사용되는 폴리머들은 대부분 코팅시 가소제, 점착방지제, 정전기방지제 등의 첨가제를 필요로 하는데, 원래의 폴리머 필름의 약물투과도는 매우 낮지만 첨가제의 영향으로 투과도가 증가되어 서방화가 어려워지거나 약물방출패턴이 원치 않는 형태로 변경되는 문제점이 있다. 따라서, 비수용성 코팅물질 중 가장 이상적인 것은, 첨가제의 사용없이 코팅이 가능하고 수용액중에서의 팽윤도가 낮아 소량의 코팅으로도 충분한 약물방출 효과를 얻을 수 있는 물질이다. 본 기술의 서방성 제제는 이중의 방출 제어막을 이용한 지속성제제로서 단일방출막을 사용한 제제에 비하여 적은 양의 방출 제어막으로도 방출제어 효과가 우수하므로, 용해도가 큰 약물의 경우에도 보다 적은 양의 제어 방출막 코팅에 의해 대상약물의 서방화가 가능할 뿐 아니라, 제조가 용이하고 제조시간 및 원료를 절감함으로써 제조경비를 줄일 수 있는 효과가 있다
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- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
분무건조법을 이용한 염산온단세트론 이수화물의 입도를 감소시키는 방법 및 이 방법에 의해 제조된 염산온단세트론 이수화물 및 이를 유효성분으로 함유하는 제약 조성물에 관한기술이다.본 기술에서는 염산온단세트론 이수화물을 이용하여 항구토제를 제조할 때 요구되는 작은 입도의 염산온단세트론·이수화물을 얻기 위하여 분무건조 방법을 통하여 얻은 염산온단세트론 이수화물이 기존의 일반적인 건조과정을 거친 약물에 비해 훨씬 더 미세한 입자로 구성됨을 밝혀내었다. 본 기술의 제조방법에 의해 염산온단세트론 이수화물을 매우 미세한 입자크기로 제조할 수 있으며, 이러한 미세한 입도의 염산온단세트론 이수화물을 이용하여 정제 조성물을 제조할 경우 정제, 조성물의 함량이 균일하게 되며 제약 조성물 투여시 빠른 약물 용출효과가 나타나게 된다.온단세트론은 분자량이 293.37인 C18H19N3O의 분자식을 가지는 화합물이며, 세로토닌 수용체에 대한 길항작용을 갖는 약물로서, 5-히드록시 트립타민3(5-HT3) 수용체에서 5-HT3을 매우 선택적이고 강력하게 길항하여 수용체에 대한 5-HT3의 작용을 억제함으로써 항암치료시 사용되는 항암제 및 방사선 치료로 인해 유발되는 오심, 구토의 예방 및 치료에 널리 사용되고 있다.염산온단세트론 이수화물을 오심, 구토의 예방 및 치료에 사용할 경우 경구투여에 적합한 약물의 단위 투여량은 5 및 10 ㎎이며, 적당한 부형제와 혼합하여 정제를 만든다. 염산온단세트론 이수화물의 경우 정제 1개당 주성분의 비율이 적기 때문에 함량 균일성이 중요한 문제로 대두되며, 정제를 제조하기 위해서는 적합한 입도를 갖는 염산온단세트론 이수화물을 사용하여야 한다. 본 기술의 염산온단세트론 이수화물은 순용매 혹은 용매 혼합물을 이용하여 염산온단세트론 원료를 결정화하는 방법을 통해 얻을 수 있다. 이때 사용되는 용매에 따라서 재수화 과정이 포함될 수 있는데, 재수화는 K2SO4 등의 포화용액이 담긴 용기에 염산온단세트론 이수화물을 항량이 될 때까지 넣어두는 방법을 통하여 이루어진다. 본 기술의 입도 감소방법에 의하면 크기가 100％ 20㎛ 미만이고, 약 85％(중량분율)는 크기가 8㎛ 미만인 매우 작은 입도를 갖는 염산온단세트론 이수화물을 얻을 수 있다. 따라서 인체내 투여시 빠른 용출로 인하여 신속한 약리작용을 일으키는 우수한 제약 조성물을 제조하는데 유용하게 이용될 수 있
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- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
클라불란산과 베타 락탐계 항생물질을 포함하는 세균감염증 치료제용 약학적 조성물에 관한 기술이다. 지금까지 클라불란산과 베타 락탐계 항생물질로 구성된 조성물이 실용화된 예는 클라불란산과 매우 유사한 약동력학적 특성을 나타내는 아목시실린과 티카르실린의 조성물에 불과할 뿐 다른 베타 락탐계 항생물질과의 조성물이 실용화된 바는 없었다. 이에 본 기술은 베타 락탐계 항생물질과 클라불란산으로 구성되며, 본 기술의 클라불란산-베타 락탐계 항생물질의 약학적 조성물은 베타 락탐계 항생물질의 첫 번째 최고 혈중농도 도달시간이 클라불란산과 같거나 길어지도록 함과 동시에 2회 이상의 혈중농도 피크를 나타내도록 하고, 베타 락탐계 항생물질의 최고 혈중농도피크 도달 시간이 클라불란산과 같거나 길어지도록 함과 동시에 생물학적 반감기도 길어지도록 약동력학적 특성을 변화시킴으로써 사람 또는 동물에서 베타 락타마제 생산 세균 감염증 치료에 매우 우수한 효과를 나타낸다. 즉, 이 클라불란산-베타 락탐계 항생물질의 약학적 조성물은 베타 락타마제 생산 세균감염증에 대한 치료효과를 상승적으로 개선시킨다베타 락탐계 항생물질의 항균 작용은 살균 작용인데, 그 살균 기전은 독특하게 세균에만 나타나므로 매우 안전하여 현재 세균감염을 퇴치하는데 베타 락탐계 항생물질인 페니실린 및 세팔로스포린류가 광범위하게 사용되고 있다. 그러나 베타 락탐계 항생물질이 광범위하게 사용됨에 따라 세균은 내성을 획득하게 되었으며, 가장 대표적인 내성 기전은 베타 락탐계 항생물질을 가수분해하여 항균활성을 소실시키는 베타 락타마제의 작용인 것으로 알려져 있다. 클라불란산은 베타 락탐계 항생물질의 일종으로, 그 자체만으로는 항균력이 약하지만 많은 세균에 있어서 베타 락탐계 항생물질에 대한 내성의 원인이 되는 베타 락타마제에 대하여 강한 친화성을 가지고 있으며, 이 효소에 대하여 비가역적으로 결합하여 그 활성을 억제하기 때문에 베타 락탐계 항생물질들과 병용하면 항균력이 현저히 증가된다. 따라서, 본 기술에서는 베타 락탐계 항생물질들의 최고혈중농도 도달 시간을 클라불란산과 같거나 길어지도록 약동력학적 특성을 변화시켜, 클라불란산이 먼저 베타 락타마제를 생산하는 세균과 접촉하여 효소의 활성을 저해함으로써 베타 락타마제에 의하여 가수분해되는 베타 락탐계 항생물질을 최소화할 수 있도록 베타 락탐계 항생물질들의 약물 방출속도를 조절함으로써, 클라불란산과의 단순 조성물에 비하여 베타 락타마제 세균 감염증에 대한 치료효과가 월등히 개선되도록 하였
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- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
수용액상에서 낮은 용해도를 갖는 항진균제중의 하나인 이트라코나졸의 약제학적 조성에 관한 것으로 용해도 및 용해속도를 증가시켜 경구투여에 적합한 제형으로의 개발을 위한 제조기술이다. 이트라코나졸 등의 아졸계 항진균제는 물에 녹기 어렵기 때문에 제제학적으로 효과적인 제형으로 개발하기 어렵다. 따라서 사이크로덱스트린과 그 유도체를 이용하여 복합체를 형성하고, 수용성폴리머와 약물을 이용한 비드 제형으로의 개발 등을 통해 이트라코나졸의 용해도와 생체이용율을 높이려는 시도가 있어 왔다. 본 기술에서는 이트라코나졸 등의 아졸류를 유기산류와 공융혼합물을 형성하게 하였을 때, 이 공융혼합물은 용해도가 클 뿐만 아니라 용해속도가 증가되어 경구용 제제에 적합하다는 사실을 밝혀내었다. 공융혼합물의 제조방법은 용융법과 용해법이 있는데, 용융법으로 제조된 이트라코나졸과 구연산의 공융화합물은 이트라코나졸 원료에 비해 용해도가 40배 증가하고, 용해법으로 제조된 공융혼합물은 54배 증가하였다. 즉, 이트라코나졸 원료에 비해 용해법(감압증류법)을 이용하였을 때 용해속도 및 용해도가 크게 증가하고, 이트라코나졸과 구연산의 공융혼합물에서 용출률 및 용출속도가 가장 우수한 것을 알 수 있다. 본 기술에 의하면, 이트라코나졸과 구연산이 공융혼합물을 형성하면 이트라코나졸의 용해도를 증가시킬 뿐만 아니라 용출속도를 증가시킬 수 있다. 따라서, 이를 이용해 경구투여에 적합한 제형으로의 개발에 기여할 수 있는 제조방법을 제공할 수 있다이트라코나졸은 C35H30C12N8O4의 분자식을 갖고, 분자량이 705.64이다. 엷은 노랑색을 띄는 분말로, 물에는 녹기 어렵고, 알코올에는 약간 녹으며, 염화메틸렌에는 잘 녹는다. 약염기성(pKa=3.7) 약물로 위액과 같은 낮은 pH 상황에서 거의 이온화되며, 지용성이 크다. 또한 약리적으로는 경구, 주사, 국소적으로 적용할 때, 광범위한 영역에서 항진균력을 나타내는 물질로 알려져 있다. 고체상태의 약물은 용해가 이루어져야 비로소 상피세포를 통한 흡수가 가능하다. 그런데 물에 난용성인 약물의 경우 고형제제로부터의 용해가 느리고 흡수과정에서 용해가 율속단계로 작용한다. 따라서 이러한 난용성 약물인 경우 용해속도를 높이려는 시도가 필요하다. 이런 시도로 약제학적인 영역에서는 일반적으로 약물의 용해성을 입자경, 결정다형, 무정형, 고용체 및 공융혼합물, 포접화합물, 용매화화합물 및 기타 병용 약물, 첨가제 등에 따라 변화시킨다. 이에, 본 기술은 용해도가 증대되고 용해속도가 증가된, 아졸류의 항진균제인 이트라코나졸과 유기산류와의 공융화합물 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 제제를 제공한다. 본 기술에 사용될 수 있는 유기산류로서는 구연산, 주석산, 아스코르빈산, 젖산, 사과산, 호박산 등이며, 공융혼합물의 제조방법으로 두 약물을 균질 혼합하고 가열하여 녹인 후 냉장에 보관하여 재결정을 얻어 공융혼합물을 얻는 용융법과, 두 약물을 유기용매에 녹여 용매를 증발시켜 공융혼합물을 형성하는 용해법 등 두 가지 방법을 모두 사용하였다
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- 2001-06-23
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암유전자의 활성에 의해 유도되는 세포의 형질전환을 저해함으로써 암세포를 정상 세포로 전환시킬 수 있는 신규한 사이클릭 테트라펩티드 화합물 및 미생물을 이용하여 화합물을 제조하는 기술이다. 본 기술에 따른 사이클릭 테트라펩티드 화합물은 기존의 사이클릭 테트라펩티드류 화합물들과는 그 구성아미노산 성분이 상이할 뿐 아니라 기존의 사이클릭 테트라펩티드류 화합물들이 분자내에 에폭시기를 함유하는데 비해 에폭시기를 함유하지 않는 특징을 갖는 신규한 화합물이다. 또한 본 화합물은 트라폭신 A, B와 마찬가지로 암유전자의 활성에 의한 세포의 형질전환을 저해하는 활성을 나타내지만, 트라폭신 A, B가 분자내의 에폭시기에 의해 활성을 나타내는데 비해 본 기술의 화합물은 에폭시기를 갖지 않으므로 세포의 형질전환 저해 활성의 기전은 트라폭신 A, B와는 상이하다. 더욱이 본 기술에서 사이클릭 테트라펩티드류 화합물을 푸사리움속의 미생물에서 생산하는 방법은 전혀 알려져 있지 않은 것이다. 본 기술의 신규한 사이클릭 테트라펩티드 화합물은 암유전자의 활성에 의하여 유도되는 세포의 형질전환을 저해함으로써 암세포를 정상 세포로 전환시킴과 동시에 암세포의 증식을 저해하므로 항암제의 유효성분으로 유용하다.현재까지 알려져 있는 항암제중 사이클릭 테트라펩티드류 화합물에는 클라미도신, HC-독소, WF-3161, cyl-1, 2 및 트라폭신 A, B 등이 있는데, 이들은 공통적으로 분자내에 에폭시기를 함유하고 있다. 특히 트라폭신 A, B는 암유전자의 활성에 의해 유도되는 세포의 형질전환을 저해하는 활성을 가지며 이 활성은 분자내에 존재하는 에폭시기에 기인하는 것으로 알려져 있다. 그러나 에폭시기를 포함하는 화합물들은 에폭시기의 큰 반응성으로 인하여 생체내 투여시 빠른 속도로 다른 물질로 전환되므로, 시험관내 효력이 우수하여도 생체내 효력으로 잘 반영되지 않으며 비선택적 반응성으로 인한 부작용 유발능이 크다는 문제점을 갖는다. 이에 푸사리움 옥시스포룸 BYJ3로부터 사이클릭 테트라펩타이드 화합물을 얻고, 이 화합물이 암유전자의 활성에 의하여 유도되는 세포의 형질전환을 저해하여 암세포를 정상 세포로 전환시킴과 동시에 암세포의 증식을 저해함을 밝혔다. 또한 본 기술의 항암제는 사이클릭 테트라펩티드 화합물과 병용 가능한 다른 항암제를 함유하는 약물학적 제제로 제공하는 것도 가능하다
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유효성분으로서 칼시토닌을 함유하는 경비투여용 액제로서 안정성을 향상시키고 비강 적용시 칼시토닌의 전신흡수를 증가시킨 새로운 비강분무액 조성 기술이다. 본 기술은 아미노에칠설폰산(타우린)이 칼시토닌에 대해 안정성을 증강시키며, 아미노에칠설폰산과 하이드록시메칠셀룰로오즈와 조성물로 제조하여 비강에 적용시 칼시토닌의 전신 흡수가 증가되며, 칼시토닌의 약리작용인 혈장 칼슘농도 저하가 더 현저히 나타남을 보여준다. 또한 적출 토끼 비점막을 이용한 in vitro 투과도의 증가도 확인할 수 있었으며, 비점막 자극성은 없었으므로, 본 기술에 따른 칼시토닌을 함유하는 약제학적 조성물은 안정성과 체내흡수를 증가시킨 칼시토닌의 새로운 비강 분무액 조성이라고 할 수 있다. 본 기술은 연어, 인간, 뱀장어, 카보, 닭, 돼지류 칼시토닌에서 선택된 칼시토닌을 활성성분으로서 함유하며, 여기에 안정화제로서 아미노에칠설폰산, 침투증강제로서 하이드록시프로필 메칠셀룰로오즈 및 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 비강 분무용 약제학적 조성물을 제공한다. 본 기술에 따른 비강 분무용 약제학적 조성물은 액제상태에서 칼시토닌의 안정성을 향상시키며, 비점막에 적용시 흡수율을 증가시키고, 비점막 자극성은 없는 신규의 약제학적 조성물이다칼시토닌은 갑상선에서 발견된 호르몬으로 32개의 아미노산으로 구성된 분자량 약 3400의 폴리펩타이드로서 혈청 칼슘 및 인산의 저하작용이 있다. 골신생을 촉진하고 신장에 대하여 뇨중 인산배설을 증가시키므로 변형성 골염, 소아의 본태성고칼슘증, 원발성부갑상선기능항진증, 암의 골전이의 치료 및 골다공증 등에 사용되고 있다. 그러나 골다공증과 같은 만성질환의 치료에 칼시토닌을 장기간 정맥, 근육 및 피하투여시는 위험과 불편을 수반하므로 다른 투여경로가 요구된다. 경구투여시는 위액 및 펩신, 트립신 등의 프로테아제에 의해 쉽게 분해되므로 미세 융모가 많고 흡수 표면적이 커서 약물의 작용 발현 시간이 신속한 비점막 투여를 생각할 수 있다. 그러나 고분자 펩타이드는 비점막을 통해 잘 통과되지 않아 생체이용률이 극히 낮다는 단점이 있다. 그러므로, 제제의 안정성을 유지하며, 독성과 자극성이 없어 신속하게 흡수촉진효과를 발현하고 장기간 사용할 때 점막조직에 손상을 입히지 않는 안전성을 보장할 수 있는 흡수 촉진제의 개발이 중요하다. 이에 본 기술은 액제상태에서 칼시토닌의 안정성을 향상시키며, 비점막에 적용시 흡수율을 증가시키며, 비점막 자극성은 없는 새로운 약제학적 조성물을 제공하고 있다
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인체 인터루킨-6의 70번째 라이신잔기를 글루타민산으로 치환하고, 80번째 글루타민산잔기를 라이신으로 치환된 변이형 인체 인터루킨-6이며, 종래 세포독성, 불안정성 등의 문제점이 있어 치료제로의 사용이 어려웠던 인체 인터루킨-6의 안정성을 향상시켜 효과적인 항암제나 면역치료제로 이용될 수 있다.인체 인터루킨-6은 T 세포, B 세포, 단핵세포 등 다양한 세포로부터 분비되는 사이토카인으로, B 세포의 항체 생산, 세포분화 촉진작용, 세포성장의 증식작용 등 다양한 작용이 있다. 또한 인체 인터루킨-6는 MCA 육종, MC 콜론 선암, 흑색종 및 폐암종 등에 항암 효과를 가지는 것으로 보고된 바 있으며, 류머티스 관절염, 심장 점액종 등의 자가면역질환과 다발성 골수종, 림프종 및 백혈병 등의 종양과도 관련이 있는 것으로 알려져 인체 인터루킨-6를 항암제나 면역 치료제로 개발할 수 있을 것으로 기대되어 왔다. 그러나, 인체 인터루킨-6는 세포독성, 불안정성 등의 문제점이 있어 치료제로의 사용에 어려움이 있다.이에 단백질 공학적인 방법으로 인터루킨-6의 아미노산을 치환한 길항성 변이형 인터루킨-6을 이용하여 세포의 수용체와 결합을 변화시킴으로써 신호전달과정을 변화시켜 치료 효과를 얻고자 하였는데, 본 기술의 변이형 인터루킨-6들의 비활성도(specific activity)는 약 1×108 U/mg으로써, 기존의 재조합 인터루킨-6과 비슷하였다.인터루킨-6의 안정성을 증가시키기 위해, 70번째 라이신에 치환될 수 있는 아미노산으로는 글루타민산, 아스파라긴산이나 알라닌 등이 선택될 수 있고, 80번째 글루타민산에 치환될 수 있는 아미노산으로는 라이신, 아르기닌 또는 알라닌이 선택될 수 있다.
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
스타필로코커스속 균주가 생산하는 혈전용해능을 가지는 새로운 스타필로키나제로서, 스타필로코커스속 균주로부터 혈전용해능이 우수한 오레우스 균주를 선별하고, 이로부터 스타필로키나제를 확인하여 그의 유전자를 분리하고 그 염기 서열 및 아미노산 서열을 결정함으로써 기존의 혈전용해제의 단점을 극복한 새로운 혈전용해성 단백질을 제공한다. 스타필로코커스속 균주를 피브린 플레이트 분석방법 등으로 조사하여 스타필로코커스 오레우스 ATCC 29213 균주가 혈전을 용해하는 기능이 우수함을 확인한 다음, 배양 상등액으로부터 새로운 혈전용해 활성을 가지는 15 kDa의 스타필로키나제를 얻은 후, 그 아미노산서열과 유전자 및 DNA 염기서열을 분석하였다.플라즈미노겐 활성인자를 정맥주사하여 혈전용해계를 활성화하는 치료법이 지난 30여년간 보편적으로 사용되어 왔는데, 혈전에 대한 특이성이 없으므로 치료기간 동안에 전신출혈 등의 부작용이 보고되었다. 최근 자연계의 여러 생물에서 존재하는 혈전용해성 물질을 광범위한 탐색 기술을 활용하여 새로운 혈전용해제로 개발하려는 많은 시도가 이루어져, 이미 은행잎 추출성분과 지렁이로부터 분리된 6가지의 혈전용해제들이 개발되어 상품화되었다.한편, 미생물에서 분리된 스타필로키나제는 인간 플라즈미노겐의 강력한 활성제로 알려져 있는 단백질로서, 혈전용해능이 우수하여 새로운 혈전용해제로 기대되고 있다.본 기술에서는 스타필로코커스 오레우스 균주에서 혈전용해 활성을 가진 물질을 분비함을 확인하고, 이로부터 스타필로키나제 유전자를 분리하고 아미노산 서열을 분석하여 다른 스타필로키나제와 비교한 결과, 기존에 알려진 3개의 스타필로키나제 변형체들은 아미노산 번호 11번, 34번, 36번, 43번 위치에서 아미노산이 치환되었는데, 본 스타필로카나제는 지금까지 알려지지 않은 33번 위치에서 아미노산이 치환된 것으로 나타났으며, 또한 아미노산 번호 36번 위치의 아미노산은 기존의 변형체가 글리신이나 라이신으로 치환되는데 반하여 음 전하를 가지는 글루탐산으로 치환되어 전체 단백질의 구조에 영향을 주는 전하 변화가 있는 새로운 스타필로키나제임을 알 수 있다. 본 스타필로키나제는 혈전용해 활성이 우수하여 급성 심근경색, 뇌경색 등을 치료하는 혈전용해제로 이용될 수 있다
- 보유기관
- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-22
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
신이(Magnoliae flos) 추출물과 신이로부터 분리한 리그난 화합물 및 이를 유효 성분으로 하는 혈소판 활성화인자(PAF; platelet-activating factor) 수용체에 작용하는 길항제에 관한 기술이다. 본 기술은 천연식물인 신이로부터 PAF 수용체에 작용하는 길항활성을 가지는 물질을 확인하여 이로부터 2종의 새로운 리그난 화합물을 분리하고, 이 화합물을 이용하여 PAF 수용체의 작용을 저해하는 길항활성을 조사함으로써 PAF 수용체와 관련된 염증 질환의 예방 및 치료제 등을 제공한다. 본 기술은 신이로부터 길항활성을 발견하고, 신이를 저급 알코올로 추출하고 여과하여 감압 농축한 다음 증류수로 현탁하고 헥산으로 세척하여 에틸아세테이트로 다시 추출하고 흡착 크로마토그래피를 반복 수행하여 새로운 리그난 화합물을 제조하고 이들 및 그 유도체들을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물을 PAF 인자 수용체에 작용하는 길항제로 제조하는 기술이다. 본 기술에 의하면 상기 리그난 화합물 및 신이 추출물은 PAF 수용체에 대한 길항활성이 매우 우수하였으므로, PAF와 관련된 염증 질환의 예방 및 치료제, 치료보조제 또는 임신과 난자 착상의 조절제로 유용하게 사용될 수 있다PAF는 염증 매개물질인 히스타민, 루코트리엔 및 프로스타글란딘 등보다 저농도에서 염증 세포를 활성화할 수 있어 다른 염증 매개물질이 합성되어 방출되는 과정을 유도하는 급성 염증반응의 개시인자로 작용한다. 따라서 혈소판 활성화 인자가 작용하는 염증 반응이 활성화되면 기관지 수축, 천식, 조직이식 거부반응, 내독소에 의한 쇼크, 위궤양, 급성 알레르기 반응, 과민성 피부염 등 다양한 염증 질환이 유발된다. 한편, 신이(Magnoliae flos)는 목련과에 속하는 중국산 신이의 피지 않은 꽃봉오리(화뢰)를 건조한 것으로 매운 맛을 가지고 있다. 예로부터 신이는 거풍, 통규의 효능이 있어 두통, 악성비점막궤양, 축농증 및 치통 등을 치료하는데 사용되었고, 일부 방향약으로도 사용되었다. 본 기술에서는 전통 천연식물로부터 PAF 수용체에 작용하여 길항활성을 나타내는 새로운 물질을 얻기 위한 과정에서 신이로부터 길항활성을 발견하여, 새로운 리그난 화합물을 분리하였다. 본 기술의 PAF 수용체에 작용하는 길항제는 생체내 또는 생체외에서 PAF의 활성조절에 이용될 수 있는데, 즉 천식, 알레르기, 관절염, 신장염, 비염, 아토피성 피부염, 심장과민증, 내독소 쇼크, 중추신경계 손상 또는 장기(조직)이식 거부반응 등의 질환의 예방 및 치료제, 임신과 난자착상 조절제로서 유용하게 사용될 수 있다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
삼백초로부터 분리정제한 세포접착저해활성을 나타내는테르페노드 화합물인 사우루릭산(saururic acid) 에 관한 기술이다. 삼백초뿌리를 알코올용액에 침지하여 얻은 추출액을 실리카겔 크로마토그래피를 수행하고, 활성이 있는 분획을 메탄올을 용매로 하여 크로마토그래피한 후 HPLC로 용출하여 활성이 있는 사우루릭산 분획을 얻어 이를 생쥐 흑색종세포인 B16-Fl에 투여한결과 강한 세포접착 저해활성을 확인하였다. 신규화합물 사우루릭산은 세포접착 저해작용이 우수하여 암세포가 세포외 매트릭스의 일종인 라미닌에 결합하는 것을 저해하는 작용이 있으므로, 암전이의 예방 및 치료제로 이용될 수 있다.세포접착현상은 세포정보전달, 암, 면역, 신경, 발생, 세포증식, 세포분화, 세포인식 등의 여러 가지 생명현상에 관여하고 있는 것으로 알려졌다. 암세포의 모세혈관 벽의 세포외 기질과의 접착은 세포외 기질 구성성분인 파이브로넥틴, 라미닌, 바이트로넥틴 등에 존재하는 접착에 관여하는 펩타이드와 암세포의 표면에서 발현되는 인테그린과 같은 접착분자의 상호작용에 의해 이루어진다. 최근 이러한 기능을 조절제어하여 암전이를 억제할 수 있는 세포외 매트릭스인 파이브로넥틴, 라미닌, 콜라겐 등에서 유래한 펩타이드가 개발되었는데, 이와 같은 물질들은 혈관내에서 단백질분해효소의 작용에의 분해되는 결점이 있어 새로운 구조의 화합물의 개발이 요구되어 왔다. 이에 세포의 접착을 억제하는 활성이 삼백초의 메탄올 추출물에 존재하는 것을 발견하고 이들 활성성분을 추적한 결과, 신규화합물인 사우루릭산을 분리하였다.라미닌으로 코팅한 마이크로플레이트에 B16-F1 세포현탁액을 첨가하여 사우루릭산의 암세포접착저해활성을 확인한 결과, 세포접착을 50% 저해하는 농도가 4.1 μg/mL인 것으로 나타나, 사우루릭산이 세포접착에 의한 질환의 치료제로서 사용될 수 있음을 보여준다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
B형 간염바이러스(HBV) 표면항원인 S 항원과 프리-S2 항원을 동시에 인식하는 이중특이항체와 그의 유전자, 이 항체를 생산하는 세포주 및 이를 이용하여 간염 항체를 얻는 방법이다. 본 기술은 두 개의 HBV 표면항원에 대한 항체를 이용하여 이들의 항원을 인식하는 영역을 동시에 2개씩 포함하도록 구성된 이중특이 항체를 개발하고, 이들의 HBV 입자에 대한 결합력 등이 기존의 단일클론 항체에 비하여 탁월하게 높아 HBV 입자를 효율적으로 중화시키도록 함으로써 효과적인 간염 예방제 및 치료제를 제공한다. 본 기술은 HBV의 S 항원을 인식하는 부위, 연결 펩타이드, 프리-S2 항원을 인식하는 부위 및 사람 유래의 항체 Fc 부위로 구성되어, 이를 동시에 인식할 수 있는 간염 항체의 유전자를 포함하는 발현 벡터를 제조하고, 이를 중국 햄스터 난소유래(CHO) 세포에 형질전환시킨 다음 메토트렉세이트를 포함하는 배지를 이용하여 간염 항체를 대량 생산하는 세포주를 선별하는 과정으로 이중특이성을 가지는 간염 항체를 제조하여 정제하는 새로운 간염 항체의 제조방법이다. 본 기술에 의하면 상기 이중특이항체는 4가 항체로서 HBV 입자의 프리-S2 항원 또는 S 항원 중의 어느 하나와도 반응하며, 그 결합능이 탁월하여 기존의 단일클론 항체보다도 더 효과적으로 HBV 입자를 면역침강시키므로 더욱 우수한 간염의 예방 및 치료제로서 유용하게 사용될 수 있다HBV는 간염의 주된 병원체인 DNA 바이러스로서, 사람에 침입하여 급성 또는 만성 간염을 일으키는데, 이러한 간염이 악화될 경우 간경화 또는 간암으로 이행된다. HBV 입자는 S 항원, 프리-S1 항원, 프리-S2 항원의 3가지 표면항원을 가지는데, 이들 항원은 바이러스를 중화하는 항체 또는 그 외 보호 항체의 생산을 유도한다. 따라서 상기 표면항원을 이용하여 HBV 감염을 예방하거나 치료하려는 많은 연구들이 시도되어 표면항원에 대한 단일클론 항체 등이 다양하게 생산되었다. 그러나, 아직까지 HBV 감염시에 S 항원 또는 프리-S 항원에 대한 두 가지 이상의 항체를 혼합하여 사용한 연구 또는 상기 두 항원을 함께 인지하는 항체를 이용한 연구는 보고된 바 없었다. 이에 본 기술에서는 B형 간염 바이러스의 다른 두 항원을 동시에 인식하여 효과적으로 바이러스를 중화시킴으로써 간염의 예방 및 치료에 사용될 수 있는 이중특이항체를 개발하였다. 본 기술에의 이중특이항체를 전기영동으로 분석한 결과, 환원된 항체의 분자량은 75kDa이고 환원시키지 않은 항체는 보통의 항체와 분자량이 동일하여 다이머 형태였다. 본 기술의 이중특이항체 TBSIg는 4가(tetravalent)의 항체로서 S 항원과 프리-S2 항원에 모두 결합하는 탁월한 이중특이성을 나타내었다. 또 본 이중특이항체 TBSIg는 HBV 입자와 친화도가 높아 HBV 입자를 면역침강시켰으며, 그 결합능은 대조군에 비해 약 4배정도 더 높게 나타나 매우 효율적인 항체임을 알 수 있었다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-20
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
사람 글루타민 합성효소(GS; glutamine synthase) 유전자를 이용하여 동물세포에서 재조합 단백질을 고수율로 생산하는 방법으로, 메티오닌 설폭시민(MSX; methionine sulfoximin)에 의해 증폭되는 GS 유전자를 이용하여 외래유전자를 대량으로 발현할 수 있는 발현벡터를 제조하고, 이를 이용하여 재조합 에리트로포이에틴(EPO)을 동물세포에서 간편하게 증폭시켜 재조합 EPO 단백질을 생산한다. 상술하면 MSX에 의해 증폭되는 사람 GS 유전자를 이용하여 동물세포 발현벡터를 제작하고, 여기에 EPO 유전자를 삽입한 발현벡터 pcDNA-EPO-dE1-gs를 제작한 후, 외래 유전자를 삽입하여 재조합 단백질을 대량 생산하는데 사용될 수 있는 발현 카세트(cassette)를 포함하는 발현벡터 pcDNA-gs를 제작한 다음, 이 발현벡터를 동물세포(CHO)에 형질전환시키고 MSX 농도를 증가시킨 배지에 배양하여 얻은 세포주를 이용함으로써 EPO를 포함한 유용한 재조합 단백질을 고수율로 생산한다. 본 기술에 의하면 단일 단계의 증폭 과정만으로도 다양한 재조합 단백질을 고수율로 생산하는 세포주를 용이하게 선발할 수 있어, 이로부터 활성이 우수한 재조합 단백질을 효과적으로 생산할 수 있다.EPO는 적혈구 형성자극인자라고도 하는 산성 당단백질 호르몬으로서 EPO를 생산하지 못하는 빈혈증을 치료하는데 사용되고 있으며, 류마티스성 관절염 환자 또는 암 환자에서의 빈혈증 치료, 수술전후의 수혈 대체 등에 이용되고 있다. 지금까지 EPO는 주로 양의 혈장, 사람의 오줌 및 재생불량성 빈혈 환자의 오줌 등에서 추출되었는데, 이를 치료에 사용하기에는 양이 충분하지 않아 널리 이용되지 못하였다. 따라서 EPO를 유전공학적 방법으로 생산하기 위하여 많은 시도들이 이루어지고 있다. 한편 GS는 모든 세포에 발현되는 효소로서 선택 마커로 사용될 수 있고, 이 효소의 억제제인 MSX을 처리하면 높은 복사본 수로 유전자를 증폭시킬 수 있는 특징이 있다. 본 기술의 발현 벡터는 MSX에 의하여 증폭되는 사람 GS 유전자를 이용함으로써, 발현 벡터로 형질전환된 세포에서 외래 유전자를 단일 단계로 간편하고 효과적으로 증폭시킬 수 있고 이로부터 활성이 우수한 형태의 재조합 단백질, 특히 재조합 EPO을 고수율로 생산할 수 있다. 기존의 Cockette 등이 보고한 TIMP 생산성과 비교하여 3배 이상 효율적인 것으로 나타나, 사람 GS 유전자와 enhancer 부위를 제거한 SV40 프로모터를 포함하는 본 기술의 발현벡터는 CHO 세포에서 유전자를 증폭시키는데 매우 유용함을 알 수 있다. 특히, 본 기술은 기존에 많이 사용하여 온 dhfr 유전자를 이용한 경우보다도 더욱 효율적인 것이다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-05-17
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
동물세포에서 p53 항암 유전자를 선택적으로 발현할 수 있는 발현 벡터 및 이를 인체 암 세포주에 형질전환시켜 암억제관련 유전자, 항암제 등을 탐색하는 용도로 사용한다. 테트라사이클린에 의존하는 프로모터 pCMV*-1의 하류에 p53 항암 유전자를 포함하고, 엡스타인바 바이러스 복제기점을 포함하며, 선택 마커로 네오마이신에 대한 내성 유전자를 포함하는 발현 벡터 pDS1293과 엡스타인바 바이러스 복제기점에 작용하는 EBNA-1 단백질의 유전자를 포함하고, 선택마커로 하이그로마이신 B에 대한 내성 유전자를 포함하는 발현 벡터 pETH를 제조하고, 이 발현 벡터 pDS1293 및 pETH를 순차적으로 인체 방광암 세포주에 형질전환시켜 테트라사이클린을 함유하는 배양액에서 p53 항암 유전자를 선택적으로 발현하는 암 세포주 EJ-p53-4를 선별하였다. 인체 암 세포주는 테트라사이클린에 의존하여 p53 항암 유전자를 효과적으로 발현시키므로 p53 유전자에 의하여 조절되는 암억제 관련 유용 유전자 및 새로운 항암제의 탐색에 널리 사용될 수 있다p53 유전자는 항암 유전자로서, 50-60%의 암 환자의 경우 이 유전자에 돌연변이 또는 결손이 일어나 p53 단백질이 제대로 된 활성을 나타내지 못하여 암이 유발되는 것으로 보고되어 있다. 또, p53 항암 유전자의 기능을 상실하고 있는 암세포를 정상 p53 항암 유전자로 형질전환시키면 형질전환된 암세포는 사멸되거나 암증식이 중단된다, 이러한 p53 항암 유전자 및 그 단백질의 유용성이 널리 알려져 전세계적으로 p53 항암 단백질을 이용한 항암 유전자 요법 및 새로운 항암제 등의 개발이 시도되고 있다. 이에 p53 항암 유전자를 선택적으로 발현하여 새로운 항암 표적인자 및 항암제 등을 탐색하는데 유용하게 사용될 수 있는 인체 암 세포주를 제공한다.발현 벡터는 p53 항암 유전자가 고효율로 세포 내에 도입되게 하는 엡스테인바 바이러스의 복제기점 및 선택 마커로 네오마이신에 대한 내성 유전자를 가지고 있으며, p53 항암 유전자를 선택적으로 발현하는 암 세포주의 형태를 테트라사이클린이 포함된 배양액 등에 각각 2주일 동안 배양한 다음 김사 용액으로 세포를 염색하여 현미경으로 관찰하여 본 기술의 암세포주를 선별하였고, 웨스턴 블럿을 수행하여 p53 유전자의 선택적인 발현을 확인하였다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-05-17
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
사람 파필로마바이러스(HPV) 16형 E6 단백질의 전사활성능에 의한 암화능을 억제하는 항암제의 효능 검색방법 및 스크리닝 방법에 관한 것으로, 특히 자궁경부암을 유발하는 HPV 16형 E6 단백질의 전사활성능을 검색하는 프로모터 활성 검색용 pRSV-luc 플라스미드가 도입된 SiHa/pRSV-luc 세포주에 항암제를 처리한 후 HPV 16형 E6단백질의 전사활성능을 검색함으로써 항암제의 기능 검색방법 및 스크리닝 방법이다. 즉, HPV 16형 E6 단백질에 의해 활성화되는 프로모터 유전자를 4종의 바이러스인 RSV, SV40, HIV, CMV으로부터 얻고, 이 프로모터 유전자와 리포터 유전자로 루시퍼라제 단백질을 암호화하는 유전자를 연결하여 4종의 플라스미드를 제조한 후, 자궁경부암 세포주 SiHa세포에 도입하여 안정한 세포주 SiHa/pRSV-luc 세포주를 제조하고 이 세포주에 여러 종의 항암제를 처리하여 HPV 16형 E6의 발현을 검색함으로써 자궁경부암에 대한 항암제의 효능을 검색하는 방법이다.이 세포주를 항암제로 처리한 후 HPV 16형 E6 단백질의 발현여부만을 검색하는 간단한 공정으로 자궁경부암에 대한 항암제의 치료 효능을 검색하고 나아가 이 세포주를 이용하여 자궁경부암 등의 항암제 스크리닝 방법을 제공할 수 있다자궁경부암은 자궁암의 90%이상을 차지하고 한국 여성에서 발생 및 사망빈도가 가장 높은 악성종양이다. 한편, HPV 16형과 18형은 남녀 생식기, 구강, 피부 등에서 악성종양과 관련되고 특히 여성자궁암의 90% 이상을 차지하는 자궁경부암을 일으키는 주요인자로 작용하는 것으로 밝혀졌으며, HPV 16형과 18형 관련 암 발생에 중추적인 역할을 할 것으로 예상되는 유전자는 E6과 E7로서, 최근 E6 단백질은 암억제 단백질 등과의 결합하는 기능 이외에 여러 유전자의 프로모터 전사활성능을 증가 또는 억제하는 기능이 알려지고 있다. 따라서 이 E6 단백질의 전사활성능과 암화 기전은 HPV에 의한 발암기작 연구 및 효과적인 자궁경부암 항암치료제를 개발하는데 있어 매우 중요하다고 할 수 있다. 이에 HPV 16형E6 단백질의 암화능과 관련된 전사활성능을 분석할 수 있는 pRSV-luc 플라스미드를 선별하고 자궁경부암 세포주인 SiHa에 이입시켜 전사활성이 증가되는 안정한 세포주 SiHa/pRSV-luc를 얻었다. 항암제인 카보플라틴, 마이토마이신 C, 시스플라틴을 처리한 후 전사활성능의 변화를 검색한 결과, 세 항암제 모두가 pRSV-luc 전사만을 일관성있게 억제하였으며, 또 E6의 발현에 미치는 항암제의 영향을 검색한 결과 상기 세 항암제 모두 E6의 발현을 억제하는 것으로 나타나, 본 기술이 매우 뛰어난 자궁경부암 항암제 효능검색 및 스크리닝 방법임을 알 수 있다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-23
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인간 알파s1 카제인을 발현시키는 플라스미드를 제조하고, 이 플라스미드를 대장균에 형질전환시킨 후 형질전환체로부터 모유의 주단백질인 카제인 중의 하나인 인간 알파s1 카제인의 재조합 단백질을 수득한다. 사람 유선 cDNA 라이브러리로부터 알파s1 카제인 유전자를 분리하여 PCR로 증폭한 후 플라스미드 pET-22b(+)에 클로닝하여 플라스미드 pHαs1C1 및 pHαs1C2를 제작한 다음, 플라스미드로 대장균 BL21(DE3)을 형질전환시키고 이를 배양하여 발현된 재조합 인간 알파s1 카제인 중 pHαs1C2에 의해 발현된 재조합 인간 알파s1 카제인을 고정화 금속친화성 크로마토크래피로 정제한다.카제인은 모유에 함유되어 있는 단백질중 40%를 차지하고, 분해물은 오피오이드, 항혈액응고성, 항고혈압성 및 면역조절기능을 제공한다. 포유류의 젖에 함유되어 있는 카제인은 α, β, κ 형태로 구분되는데, 우유에는 알파형이 50%이상 함유되어 있는 반면, 사람의 경우에는 그 양이 적어 종래에는 알파형이 결여된 것으로 알려져 있었다. 1994년에 사람 모유에 알파s1 카제인이 0.06% 함유되어 있음이 보고된 후, 유전자도 클로닝되었으나 그 기능은 아직까지 보고된 바 없었다. 본 기술의 가장 큰 특징은 인간 알파s1 카제인을 발현시키는 두 가지 플라스미드중 pHα s1C2는, 카르복시 말단에 6개의 히스티딘이 붙은 재조합 인간 알파s1 카제인을 발현시키도록 제작하여, 고정화 금속친화성 칼럼크로마토그래피인 Ni-NTA 칼럼크로마토그래피로 용이하게, 그리고 순수하게 정제된 인간 알파s1 카제인을 얻을 수 있는 뛰어난 효과가 있다는 것이다. 본 기술에 의하면 재조합된 인간 알파s1 카제인을 효율적으로 발현시킬 수 있으므로, 사람 모유의 알파s1 카제인 기능 연구 및 생물의약산업상 매우 유용한 것으로 판단된다
- 보유기관
- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-05-17
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
포스포리파제 C-감마2 동위효소를 특이적으로 인지하여 결합할 수 있는 단클론성 항체 단백질, 이를 분비하는 융합세포주에 관한 것으로, 세포내 신호전달체계에 있어서 중추적 역할을 하는 효소인 포스포리파제 C-감마2를 생체 또는 병리학적 시료로부터 간편하고 민감하게 검출 및 정량할 수 있는 수단으로서의 단클론성 항체와 이를 균질로 대량 생산할 수 있는 융합세포주 및 이들 융합세포주를 이용한 상기 단클론성 항체를 제조하는 방법이다.즉, 사람의 포스포리파제 C-감마2 동위효소를 순수 분리 정제하고, 이것으로 생쥐(Balb/c)를 면역시킨 후, 이들로부터 비장 세포를 분리하여 생쥐의 골수종 세포인 Sp2/0-Ag14 세포와 융합시킴으로써, 단클론성 항체를 분비하면서 계속적으로 세포배양이 가능한 새로운 잡종 세포주를 개발하고, 이 세포주를 배양하여 그 배양액으로부터 균질의 항체를 대량으로 생산하는 방법이다. 본 기술은 포유동물 세포의 생리 활성, 분화 및 성장 조절을 연구하는 기초 생물학 연구의 좋은 수단으로 이용될 수 있을 뿐만 아니라, 단클론성 항체는 포유동물의 포스포리파제 C-감마2 효소에만 특이적으로 반응하는 성질을 갖고 있으므로, 세포내 신호전달체계에 관한 연구에 응용하여, 암 등 관련질병의 기작을 밝히는데 사용될 수 있다포스포리파제 C는 외부의 신호를 받아 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트로부터 디아실글리세롤 및 이노시톨 1,4,5-트리스포스페이트를 생성함으로써, protein kinase C를 활성화시키고 칼슘 이온을 세포질로 방출하게 하는 등 세포내 현상, 특히 신호전달계의 중심 효소이다.이중 포스포리파제 C-감마 동위효소는 세포의 성장과 분화, 호르몬이나 소화 효소의 분비 및 다른 신호전달체계의 조절에 중추적인 역할을 하고 있으며, 이에 따라 포스포리파제 C-감마 동위효소의 역할과 작용기전 등에 관한 연구가 암, 내분비 및 의약품 연구자들의 관심의 대상이 되고 있다. 항체는 다양한 서브타입 특이적인 2차 항체를 사용한 효소면역측정법에서, 사람의 포스포리파제 C-감마2 동위효소에 대해 생쥐에 생성된 면역 글로불린 M이며, 포스포리파제 C 효소중 분자량 145,000의 포스포리파제 C-감마1 동위효소와는 교차 반응성을 나타내지 않으나, 분자량 140,000의 포스포리파제 C-감마2 동위효소는 특이적으로 인지하였다. 즉, 본 항체는 뛰어난 친화력으로 세포내에 극미량으로 존재하는 포스포리파제 C-감마2 동위효소만을 특이적으로 인지할 수 있으며, 더욱이 소뿐만 아니라 모든 포유동물의 포스포리파제 C-감마2 동위효소에 특이적으로 반응하는 특징을 가지고 있
- 보유기관
- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-23
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높은 활성을 갖는 새로운 C형 간염바이러스(HCV) 프로테아제 및 이에 대한 저해제 탐색 방법으로, 효모를 이용하여 HCV의 프로테아제의 생체내에서의 활성을 측정하고, 효모의 유전자 발현체계를 이용하여 HCV 프로테아제의 저해제를 탐색하는 방법이다.즉, DNA 결합 부위와 전사 활성 부위 사이에 HCV프로테아제와 그 기질 부위를 첨가시킨 인위적인 전사활성인자로 된 융합 단백질, 즉 HCV의 헬리카제 부위가 제거되고, NS3의 아미노 말단(N말단)과 NS4A가 직접 결합되어 있는 융합 단백질 형태로 합성된 높은 활성의 HCV 프로테아제를 제조하고, 상기 융합 단백질을 코딩하는 플라스미드를 이용하여 효모를 형질전환시킨 후, 배지 위에 론(lawn)으로 키워 여기에 여러 가지 프로테아제 저해제를 적용하는 저해제 탐색 방법이다. 본 기술에 의하면 높은 효율의 C형 간염바이러스의 프로테아제 재조합 및 프로테아제 활성조사 시스템이 제공되며, 효모의 전사 메커니즘을 이용한 C형 간염 바이러스의 프로테아제에 대한 저해제 스크리닝 시스템이 제공될 수 있다HCV는 비A 비B형 간염의 주된 원인으로서, 간염을 일으키고, 간경변을 거쳐 결국 간암을 유발하는 것으로 알려졌다. HCV는 게놈이 약 3,000개의 아미노산을 코드화하는 (+)센스 RNA로 구성되어 있고 지질의 막으로 싸여 있을 것으로 추정되고 있다. 이 HCV RNA의 구조 단백질에 해당하는 코어와 E1, E2/NS1의 프로세싱은, 숙주 세포의 소포체막에 있는 시그널라제가 작용해서 이루어지고, 그 외의 비구조 단백질들의 프로세싱에는 HCV가 코드화하고 있는 NS3이 프로티애즈로 작용하는 것으로 추정된다. 본 기술에서는 효모의 GAL4 단백질의 활성화 부분에 세균의 Lex A 단백질을 융합하여 인위적인 전사 인자를 생산하였고, 이 전사 인자의 DNA-결합 부위와 전자 활성화 부위 사이에 HCV 프로테아제와 이 프로테아제에 의하여 잘리는 부위를 코드하는 염기 배열을 넣고 융합 단백질을 만들었다. 리포터유전자로 β-갈락토시데이즈를 가지고 있는데, 이 유전자 앞에는 Lex A 단백질 결합 부위가 있어 혼성 단백질의 결합과 전사 활성화 기능에 의해 β-갈락토시데이즈 유전자의 발현 정도가 결정된다. 이 혼성 단백질을 코딩하는 플라스미드를 이용하여 효모를 형질전환시킨 후에 β-갈락토시데이즈의 활성 정도를 측정하여 HCV 프로테아제의 활성 또는 HCV 프로테아제 저해제의 활성을 알 수 있다.
- 보유기관
- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-23
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소화기암 특이 항원인 암태아성 항원(CEA; carcinoembryonic antigen)을 인식하는 단클론성 항체 및 그를 코드하는 DNA의 염기 서열로서, CEA만을 특이적으로 인지하여 결합할 수 있는 항체를 개발하여 CEA에 대한 단클론성 항체의 아미노산 서열 및 그를 코드하는 DNA의 염기 서열을 제공하는 것이다. 인체 대장암 세포주 LS 174T로부터 사람 CEA를 순수 분리 정제하고, 이를 생쥐에 주사하여 생쥐를 면역시킨 후, 면역된 생쥐로부터 비장 세포를 분리한 다음 생쥐의 골수종 세포, 예를 들어, Sp2/O-ag14 세포와 융합시켜 배양이 가능한 새로운 융합세포주를 제조한 다음 배양함으로써 소화기암 특이항원인 CEA를 특이적으로 인지하는 단클론성 항체를 대량으로 생산할 수 있는 방법이다. 항CEA 항체 및 그를 코드하는 DNA는 소화기암의 진단 및 치료제의 개발에 널리 이용될 수 있다CEA는 대장암 조직에서 처음으로 분리된 암 관련 항원으로서 여섯 개의 이황화 결합을 가진 단일 폴리펩티드이고, 40-60% 정도의 당질 잔기로 이루어진 분자량 180-200kDa 정도의 당단백질이다. 또한, CEA는 태아의 대장 점막 이외에도 여러 종류의 소화기 암에서 높게 발현되어 범암종성 항원으로 널리 알려져 있고, 한국인에게 높은 빈도로 발생하는 위암에서도 CEA의 발현이 증대되어 있음이 보고된 바 있다.CEA는 초기에 대장 및 직장암의 특이 표지로 추정되었다. 그러나 정상조직에서도 극소량이 발견되었고, 양성암종이나 다른 종류의 악성종양을 지닌 환자의 혈청에도 존재하는 것이 증명되었다. 따라서, 현재 CEA의 정량법은 대장 및 직장암의 검색, 수술전후 CEA 혈청치의 비교에 의한 암의 재발의 발견 등에 널리 쓰이고 있다.본 기술은 CEA 특이적인 단클론성 항체 항CEA 79의 아미노산 서열 및 그를 코드하는 DNA의 염기 서열을 제공하며, 이 항CEA 79 항체의 대장암 세포에 대한 세포 반응성 검사결과, 소화기암 면역요법제 개발에 이용될 수 있을 것으로 판단된다
- 보유기관
- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-20
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