일반기술
보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
위궤양 치료제인 오메프라졸의 중간체인 피리딘 유도체의 제조방법으로서, 피리딘 모핵의 4-NO2 기를 메톡시기로 치환시킴에 있어서 피리딘 모핵의 N-옥사이드 화합물을 사용하지 않고도 그 치환이 가능하다는 사실을 밝혀내었으며, 따라서 N-옥사이드 생성공정 및 4-NO2기를 메톡시기로 치환후의 N-옥사이드 환원공정이 필요없고, 전체적인 수율이 약 67% 이상으로 목적화합물을 제조할 수 있는 새로운 방법이다.종래의 2-하이드록시메틸 피리딘 유도체의 제조방법은 중간 생성물인 2-시아노피리딘 유도체를 과산화수소로 다시 산화시켜서 피리딘 모핵의 N-옥사이드로 전환시킨 후, 니트로기(NO2)를 메톡시기(CH3O)로 치환시키고, 다시 N-옥사이드를 환원시켜서 카르복실산 메틸에스테르 유도체를 제조하여야만 되는 번거로운 공정을 거쳐야만 하였으며 전체적인 수율이 약 28% 정도의 낮은 수율에 불과하였다. 이에 본 기술은 2-시아노피리딘 유도체의 니트로기를 메톡시기로 치환시킨 다음, 염기성 수용액 중에서 가수분해 반응시켜 카르복실산 메틸에스테르 유도체를 제조하고, 이를 메탄올 또는 에탄올과 산촉매하에서 반응시켜 피리딘 카르복실산의 메틸에스테르 또는 에틸에스테르 화합물을 제조한 다음, 환원제인 소디움보로하이드라이드를 사용하여 에스테르화된 부분을 환원시켜 목적화합물인 2-하이드록시메틸 피리딘 유도체를 고수율로 제조한다
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- 특허법인충정
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- 2001-05-16
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
우수한 항균작용을 갖는 세펨 유도체(세포탁심)를 제조하는 새로운 방법으로 비스[4-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔릴)메틸]카보디이미드(BDC)와 1-히드록시-6-트리플루오로메틸벤조트리아졸(FOBT)을 사용하여 고순도의 세펨 유도체를 제조하는 간편한 방법을 제공한다. 세펨 유도체는 일반적으로 유기산과 7-아미노-세팔로스포란산(7-ACA) 또는 그 유도체를 반응시켜 합성될 수 있다. 종래에는 유기산의 반응성 아미드 및 혼합 산무수물을 제조하는 것에 의한 활성화 방법으로 유기산의 아민기를 보호한 다음 아실화 반응을 시키고 나서 다시 보호기를 제거하여야 하는 번거로움이 따른다. 본 기술은 유기산의 아미노기를 보호하지 않고 실온에서 반응성 유도체로 전환시켜 이를 반응액으로부터 분리해낼 필요없이 7-아미노세팔로스포란산과 온화한 온도조건에서 아실화 반응을 정량적으로 수행시킨 후 고순도의 목적물을 분리해낼 수 있으므로 종래의 기술에 비해 경제적이고 공업적 생산 공정에 유용하여, 산업화에 매우 유리하다종래의 세펨유도체의 제조방법은 유기산의 2-피리딘티오에스테르, 2-벤조티아졸에스테르, 1-히드록시벤조트리아졸에스테르를 제조한 다음 아실화 반응을 수행하여 목적화합물을 제조한다. 이와 같은 반응성 에스테르 화합물의 제조시에 축합제로서, 디시클로헥실카보디이미드(DCC) 등을 사용할 수 있는데, 이 방법을 이용하여 산업적 규모로 세펨 유도체를 제조하고자 하는 경우, 생성된 유기산의 반응성 에스테르를 분리해 낸 후 다시 7-ACA나 그의 유도체와 반응시켜야 하는 번거로움이 있을 뿐 아니라, 목적하는 세펨 유도체에 소량의 디시클로헥실우레아(DCU)가 부산물로 함유되므로, 이를 완전히 제거하는데 어려움이 있었다. 본 기술에서는 축합제를 이용한 아실화 반응을 이용하여, 유기산의 아민기를 보호하지 않고 온화한 온도조건에서 반응성 유도체로 전환시킨 후 이를 직접 아실화 반응시켜 고순도의 목적물을 수득할 수 있으므로 종래의 방법에 비해 경제적이며 공업적으로 세펨유도체의 제조가 가능하다
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- 2001-05-16
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
항생물질로써 유용하게 사용되는 세팔로스포린계 항생제의 제조를 위한 중간체로써 광범위하게 사용될 수 있는 티아졸릴아세트산의 새로운 활성 트리아진 유도체 및 그의 제조방법에 관한 것이다. 세팔로스포린 화합물들은 일반적으로 티아졸릴아세트산 화합물과 7-아미노세팔로스포란산의 베타락탐 핵의 아미노기의 아실화반응에 의해 아미드 결합을 형성시킴으로써 제조되는 것을 알려져 있다. 본 기술에서는 종래 세팔로스포린 화합물의 제조공정중, 활성에스테르화 방법의 단점을 해소시키고 보다 효율적으로 세팔로스포린 화합물을 제조할 수 있는 유용한 중간체를 개발하고자 하였으며, 이에 신규한 티아졸릴아세트산의 활성 트리아진 유도체를 제조하고, 이 화합물을 중간체로 사용하여 세팔로스포란산과 반응시킴으로써 유용한 세팔로스포린계 항생제를 효율적으로 제조할 수 있음을 밝혀내었다. 본 기술에 따라 제공되는 활성 티아졸트리아진 유도체는 반응성이 매우 크고 대단히 안정하여 통상의 산,염기를 이용하여 정제가 용이하고, 취급이 쉬우며 거의 정량적인 수율로 수득되고, 또한 순도면에서도 HPLC 상에서 98%이상의 고순도로 수득되므로 추가의 정제단계를 수행할 필요없이 바로 다음 반응에 사용하여도 충분하고, 세팔로스포란산과의 반응시간 또한 매우 짧아 세팔로스포린 제조분야에서 중간체로 사용할 수 있는 대단히 실용적인 화합물이다활성 티아졸트리아진 유도체는 아미노티아졸아세트산 화합물을 트리아진 유도체와 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 활성 에스테르를 중간체로 사용하여 세팔로스포린 화합물을 제조함으로써 다음과 같은 장점이 있다. 첫째, 제조가 용이하고 사용이 간편하며 화학적으로 안정한 트리아진 화합물을 사용하여 활성 티아졸트리아진 유도체를 거의 정량적인 높은 수율로 선택적으로 제조하였으며, 둘째, 본 기술의 활성 티아졸트리아진 유도체는 여러 가지 유기용매에 대하여 용해가 매우 잘 되기 때문에 아실화 반응이 균일계 반응으로 진행되어 단시간에 부반응 없이 반응이 완료되고, 셋째, 산염화물이나 혼합 산무수물과는 달리 반응성 활성에스테르 화합물인 본 기술의 화합물은 상온에서 대단히 안정하므로 분리하여 상품화 할 수 있고, 넷째, 반응이 실온에서 수행될 수 있으며, 다섯째, 아미노기를 보호하지 않고도 부반응없이 반응이 거의 정량적으로 진행되기 때문에 티아졸릴아세트산의 아미노 그룹을 보호하여 반응시킨 다음 다시 보호그룹을 제거하는 비경제적인 다단계 제조법이 필요 없으며, 여섯째, 반응이 완료되면 쉽게 미반응 물질들을 제거할 수 있으므로 기존의 방법보다 제조시설을 간단히 할 수 있고, 까다로운 공정이 없으므로 경제적이고도 새로운 아실화 방법이라고 할 수 있다
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
알코올 또는 티올 화합물을 촉매 존재하에 카보디이미드 화합물과 반응시켜 디페닐메틸 그룹을 갖는 신규 화합물을 제조한 다음, 이를 에스테르화제로 사용하여 간편하게 세팔로스포린 화합물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 현재까지 세팔로스포린 화합물의 카복실산을 간단하고 안전하게 에스테르화하는 방법은 개발되지 못하였으며, 더욱이 대량생산에 적용시킬 수 있는 방법은 전무한 실정이다. 이에 본 기술에서는 종래 기술들의 문제점을 개선하여 보다 온화한 조건에서 이중결합의 위치전이 없이 간편하게 세팔로스포린 유도체의 카복실산을 에스테르화하는 방법을 개발하여 산업적으로 적용하고자 하였으며, 그 결과 본 기술에 의해 제조된 디페닐메틸 그룹을 갖는 신규한 화합물을 에스테르화제로 사용함으로써 효율적이고도 경제적인 에스테르화 방법을 제공하게 되었다.따라서, 본 기술에 따른 신규한 에스테르화제 화합물 및 이 화합물을 이용한 세팔로스포린 유도체의 제조방법은 세팔로스포린계 항생제분야에서 매우 유용하게 이용될 수 있을 것으로 기대된다1. 저렴하고 용이하게 구입 가능한 원료를 이용하여 중성의 매우 온화한 조건에서 목적하는 세팔로스포린 유도체를 제조할 수 있다.2. 에스테르화제로 사용되는 신규 화합물이 매우 안정하여 건냉암소에 보관할 경우 6개월 이상의 장기보관이 가능하다.3. 신규한 에스테르화제를 제조한 후, 필요에 따라 이를 분리하지 않고 한 용기내에서 연속반응(One-pot Reaction)을 수행하여 목적 화합물을 제조할 수 있다.4. 신규한 에스테르화제를 제조하기 위한 반응이 유기용매 부재하에 직접 반응물을 접촉시켜 이루어질 수 있어 폐수발생을 극적으로 줄일 수 있을 뿐 아니라, 전체 반응이 거의 실온에서 이루어질 수 있는 등 공업적으로 적용하기에 매우 용이하다.5. 세팔로스포린 유도체의 에스테르화 반응에 있어서 심각한 문제점으로 대두되고 있는 이중결합 위치의 전이가 본 기술에 따른 방법에서는 전혀 발생하지 않는다.6. 목적화합물을 제조하는 반응이 완료된 후 생성된 우레아 유도체가 반응후 반응액에 잘 녹지 않기 때문에 간단한 여과공정으로 제거할 수 있어 목적하는 반응생성물의 단리가 매우 용이하
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- 2001-05-18
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
본 기술은 항균제로 유용한 신규한 2-(2-치환된 비닐피롤리딘-4-일)티오카바페넴 유도체, 그의 염 및 그의 제조방법에 관한 것이다.명세세 오본 기술은 박테리아 감염성 질환에 대한 치료제로써 유용한 다음구조식(I)의 신규한 2-(2-치환된 비닐피롤리딘-4-일)티오카바페넴 유도체 및 그의 염에 관한 것이다.명세서 오
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- 2001-04-21
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
세프포독심 프록세틸은 C-3위치에 메톡시메틸기와 C-4 카복실산을 에스테르화 시킨 pro-drug type의 3세대 경구용 항생제이다. 주요 중간체인 7-아미노- 3-메톡시메틸세팔로스포린산(7-AMCA)은 핵심 기술중 하나이며, 중간체인 7-AMCA와 아미노티아졸아세트산을 활성화시약을 사용하여 축합시켜 세프포독심을 제조하고 이소프로필요오드메틸카보네이트와 염기존재하에서 에스테르화시켜 curde세프포독심프록세틸을 얻고, 이를 정제하여 완제품인 세프포독심프록세틸을 제조한다. 본제품은 3세대 경구용항생제로 사용과 복용이 간편하고 그람양성균, 그람음성균에 대해 광범위한 활성을 나타내며, β-락타마제에 대한 안정성이 크고 경구흡수도가 높아 그 시장이 크게 증가하고 있다. 본 기술은 Δ2 이성체의 생성이 없이 목적하는 Δ3 이성체 형태의 세팔로스포린 유도체를 단시간내에 고수율로 제조할 수 있는 경제적인 방법이다. 즉, 상간이동촉매(Phase Transfer Catalyst)인 테트라-n-부틸암모늄염을 사용하여 세펨 유도체로부터 세펨 에스테르의 제조시에 부반응으로 생성되는 Δ2 세펨 이성체의 생성을 거의 완전히 억제하고 고수율 및 고순도로 세펨 에스테르 유도체를 생성시키고, 이 화합물 또는 그의 안정한 염을 티아졸릴아세트산의 고활성 반응성 에스테르 유도체를 이용하여 아실화시킴으로써 아미노보호기의 사용이나 그의 제거공정을 배제하고 단시간의 반응공정으로 목적하는 세펨 유도체를 현저히 개선된 수율로 제조할 수 있는 새로운 제조방법을 제공한다. 본 기술은, 선행기술의 방법에 따라 경구용 세팔로스포린 에스테르 프로드럭을 제조하는 경우에 야기되었던 Δ2 이성체의 생성을 현저히 억제함으로써, 최종 생성물의 수율과 순도를 현저히 높일 수 있고 아실화 반응시에 이탈된 활성화기를 쉽게 제거할 수 있어, 경제적이고 단순화된 공정을 제공한다세프포독심프록세틸의 제조에 있어서 세파계 중간체 원료인 7-AMCA의 제조기술은 핵심기술중의 하나이며 7-AMCA는 7-ACA로부터 산촉매하에서 β-락탐화합물의 락톤화를 피하여 제조한다. 수득된 7-AMCA와 아미노 티아졸아세트산의 축합반응을 통해 높은 수율로 세프독심을 제조한다. pro-drug type의 경구용 항생제 개발시 가장 고난도 기술이 요구되어지는 세팔로스포린산의 에스테르화 반응은 상간이동촉매외 극성 유기용매 존재하에서 실시하므로써 부반응인 △2이성체 생성을 억제하고 원하는 △3이성체인 세프포독심프록세틸을 고수율과 고순도로 제조하였다. 즉, 본 기술은 세파중간체인 7-AMCA의 제조와 △2이성체 생성없이 세프포독심프록세틸을 제조하는데 그 특징이 있다. 국내에서 시판되는 세프포독심 프록세틸의 시장규모는 단일품목으로 44.9억원(2000년 기준)이며, 전량 일본으로부터 완제품 형태로 수입하여 판매하고 있다. 해외시장은 2.07억불(1999년 기준)로 이중 일본이 1.06억불(1999년 기준)이고, 미국의 경우1.01억불(1999년 기준)로 그시장성이 매우 크다. 본 기술상의 특장점은 다음과 같다. 첫째, 상간이동촉매인 화학식 3 의 화합물을 사용하기 때문에 부반응으로 인한 Δ2 세펨 이성체의 생성없이 목적하는 Δ3 세펨 이성체만을 생성시킴으로써 Δ2 이성체를 분리 및 정제하기 위한 까다롭고 복잡한 공정이 필요없이 고순도 및 고수율로 목적하는 Δ3 세펨 에스테르 유도체를 수득할 수 있으며, 둘째, 제조가 용이하고 사용이 간편하며 실온에서 장시간 보관이 가능한 대단히 안정한 형태인 티아졸아세트산 활성 에스테르를 사용하여 세펨 에스테르 유도체를 아실화시킴으로써 고수율로 경구용 세팔로스포린 유도체를 수득할 수 있고, 셋째, 티아졸아세트산 활성 에스테르를 사용함으로써 세펨 에스테르의 아미노기를 보호하지 않고도 부반응이 일어나지 않고, 반응 또한 거의 정량적으로 진행하여 여타의 아미노 보호기를 사용한 경우보다 높은 수율로 목적화합물을 수득할 수 있고, 또한 반응후에 유리된 활성화기도 쉽게 제거할 수 있다는 이점을 갖고 있다.
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-20
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
카바페넴계 항생제의 제조를 위한 중요한 중간체로 사용될 수 있는 3-치환된-7-옥소-1-아자비사이클로[3,2,0]헵트-2-엔-2-카복실레이트 화합물 및 그의 제조방법에 관한 것으로 카바페넴계 항생제는 인간과 동물의 박테리아 감염성 질환의 치료를 위한 항생제로 유용하게 사용될 수 있는 화합물로서 그람양성균과 그람양성균 및 대장균에 대해 매우 우수한 항균력을 나타내는 비고전적 베타락탐계 항생제이다. 종래에 알려진 목적화합물의 제조방법은 공정이 대단히 길고, 그 수율 또한 낮아 산업적으로 이용하기 곤란하였다. 이에 종래 기술의 문제점을 개선하고 간편하고도 짧은 공정의 제조방법을 제공하고자 하였으며, 그 결과 합리적 이탈기를 가지는 새로운 카바페넴 중간체를 개발하였다. 즉, 본 기술이 제공하는 3-치환된-7-옥소-1-아자비사이클로[3,2,0]헵트-2-엔-2-카복실레이트 화합물은 종래 기술에서 문제가 되었던 부반응이 없이 간단한 방법에 의해 화학식 2 의 카바페넴계 항생제를 고수율 및 고순도로 제조할 수 있는 유용한 중간체 화합물이다카바페넴계 항생제는 토양 미생물인 스트렙토마이세스 카틀레야로부터 미생물 발효 및 정제과정을 통해 카바페넴의 모핵을 갖는 티에나마이신을 수득할 수는 있지만 이와 같이 스트렙토마이세스 카틀레야로부터 분리하는 경우에는 발효수율이 낮아 실제 산업적 목적으로는 이를 원료로 사용할 수 없기 때문에 합성적 방법을 통해서 얻어야 한다. 그러나 종래의 제조방법은 그 공정이 대단히 길어 산업적 이용이 불가능하고 각각의 반응단계별 조작이 대단히 어려우며, 입체화학적으로 사용할 수 없는 이성체가 많이 생겨 이의 분리 정제가 어렵고, 수율 또한 낮은 단점을 가지고 있다. 특히 카바페넴계 항생제의 주요 중간체인 디페닐포스포릴 이탈기가 도입된 2-옥사카바페넴 화합물은 후속반응에서 티올 유도체와 축합반응시킬 때, 반응이 전부 진행되지 않기 때문에 축합 수율이 낮고, 이탈된 디페닐포스포릴기와 많은 부반응으로 인해 실리카겔을 사용한 칼럼크로마토그래피를 이용하여 정제해야하기 때문에 공정상의 어려운 문제가 있다. 따라서, 본 기술에서는 2-옥사카바페넴 화합물을 트리아진 유도체와 반응시켜, 종래의 디페닐포스포릴 이탈기가 아닌 다양한 트리아지닐 그룹을 이탈기로서 도입시킴으로써, 카바페넴 중간체 화합물을 간편하고 짧은 공정으로 고수율 및 고순도로 제조할 수 있다
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-18
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
세팔로스포린계 항생제의 합성중간체 제조방법에 관한 것으로, 본 기술의 화합물은 세팔로스포린계 항생물질의 합성에 필수적인 전구물질로서 매우 중요한 중간체이다. 종래 본 목적화합물의 제조방법들은 불필요한 락톤화합물이 다량으로 생성되어 별도의 정제과정이 요구되는 등 공정 및 수율상의 문제점이 많았다. 이에 본 기술은 이러한 선행기술들의 문제점을 개선하고자 하였으며, 그 결과 완충용액을 사용하여 반응액의 pH 변화를 억제함으로써 불필요한 락톤화합물이 생성되지 않게 하고, 반응조건을 완화시킬 수 있음을 밝혀내었다. 즉, 본 기술은 세팔로스포린 중간체를 제조함에 있어서 부반응 물질인 락톤화합물의 생성을 근본적으로 억제하는 경제적인 새로운 제조방법을 제공한다. 본 기술에 의하면, 종래의 방법에서는 불가피한 부반응 물질인 락톤화합물의 생성 및 강염기의 사용에 따른 베타-락탐환의 분해산물의 생성을 억제하였고, 또한 종래에 비해 획기적인 90%의 수율로 목적하는 세팔로스포린 중간체를 합성할 수 있어 수율증가에 따라 제조원가를 낮춤으로써 효율적이고 경제적인 합성방법이 제공된다. 따라서 본 기술에 따른 목적화합물의 제조방법은 세팔로스포린계 항생제의 산업적인 생산에 적용할 수 있는 유용한 방법이 될 것으로 기대된다종래의 제조방법을 보면 우선 7-아미노 세팔로스포린산을 H2O/MeOH 존재하에서 가성소다로 가수분해하여 아세틸 그룹을 제거하고 7-아미노 그룹을 보호하기 위해 염기 존재하에 해당 아실화제를 반응시켜 목적하는 화합물을 합성하는 방법이 있다. 그러나 이 방법은 반응조건에 매우 민감하여 염기에 불안정한 베타-락탐환이 개열되는 문제점이 있으며, 아실화제를 이용한 아실화 반응시 락톤 화합물이 30%이상 생성되었으며, 총 수율이 50% 수준을 넘지 못하고 있다.한편, 7-아미노-3-히드록시메틸-3-세펨-4-카르복실산과 페닐아세틸클로라이드를 반응시켜 목적 화합물인 7-페닐아세트아미도-3-히드록시메틸-3-세펨-4카복실산을 합성하는 방법이 있다. 그러나, 상기 방법도 불필요한 락톤 화합물이 30%이상 생성되었으며, 분리정제과정을 통하여 목적 화합물을 단지 50%의 수율로 얻을 수 있었다. 따라서 종래의 방법은 불필요한 락톤화합물이 다량으로 생성되어 별도의 정제과정이 필요하므로, 공정상의 번거로움 및 수율 저하를 초래하고 이로 인한 제조경비의 증가 등의 문제로 인해 산업적으로 적용할 수 있는 경제적인 방법이라고는 할 수 없다. 이에, 본 기술은 종래 불가피한 부반응 물질인 락톤 화합물과 베타-락탐환의 분해산물의 생성을 획기적으로 억제하고, 세팔로스포린 중간체를 고수율로 얻을 수 있는 방법이다
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- 등록일
- 2001-06-21
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
세펨산 유도체를 카르복실기 활성화시약인 세슘카보네이트 또는 세슘하이드로겐카보네이트를 사용하여 알킬할라이드와 O-알킬화 반응시켜 광범위 항생제인 세펨 유도체를 제조하는 새로운 방법이다. 출발물질인 세펨산 유도체를 아미노티아졸기의 아민기를 보호하지 않고 유리아미노기가 존재하는 형태로 유기용매중에서 특정의 카르복실기 활성화시약을 이용하여 제조하므로써 △2 이성체가 거의 또는 전혀 생성되지 않고 목적하는 △3 이성체 형태인 세펨에스테르 프로드럭을 제조할 수 있는 방법을 제공한다.종래의 제조방법은 먼저 세펨산을 불활성 유기 용매하에서 염기를 사용하여 빙냉하에서 알킬카보네이트와 반응시켜 △3 이성체를 얻은 후 이를 칼럼 크로마토그래피로 정제하는 방법이 있고, 또 세펨산의 금속염을 불활성 유기용매 하에서 알킬카보네이트와 반응시켜 △3 이성체를 얻는 방법이 있다. 그러나, 이 방법들은 △2 이성체의 생성을 억제할 수 없으며 이를 칼럼 크로마토그래피로 정제해도 순수하게 △3 이성체만 얻어내는 것이 어렵다. 한편, 출발물질로서 세펨산 대신에 세펨금속염을 사용하여 세펨에스테르 유도체를 제조하는 방법이 있으나, 이 방법은 특정한 용매계를 가지는 반응계에서 제한된 종류의 알킬할라이드를 사용함으로써 특정 종류의 세펨유도체의 경우에만 제한적으로 △3 이성체가 △2 이성체로 전환되는 것을 막을 수 있을 뿐이다. 이에 비해 본 기술의 카르복실기 활성화 시약인 세슘카보네이트 또는 세슘하이드로겐카보네이트는 세펨유도체의 카르복실기를 강력하게 활성화시키므로 낮은 온도에서 효과적으로 알킬할라이드와 반응하여 O-알킬화 반응을 쉽게 하므로 △2 이성체가 거의 생성되지 않고 목적하는 △3 이성체가 대부분 생성되는 장점이 있다. 따라서 본 기술에 따르면, 세펨산 유도체를 사용하여 세펨염 형태의 중간체를 분리하지 않고 한 용기내(one pot reaction)에서 제조반응을 수행하여 낮은 온도 조건에서 알킬 할라이드와 짧은 시간동안 반응시켜 보호기 도입, 제거 공정 및 목적물의 정제공정 없이 원하는 △3 이성체 형태의 세펨 에스테르 유도체를 높은 수율 및 높은 순도로 얻을 수 있다.
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-06-21
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
3-포르밀리파마이신 SV를 테트라하이드로푸란과 메탄올의 혼합용매내에서 1-아미노-4-사이클로알킬피페라진 화합물과 반응시킨 후, 결정화시켜 생성화합물을 분리함으로써 피페라지닐이미노 리파마이신을 제조하는 방법이다. 본 제법은 용해도가 우수한 혼합용매를 사용하므로 작업시간이 단축되고 고가의 테트라하이드로푸란 대신에 가격이 저렴한 메탄올로 일부가 대체되기 때문에 원가 및 환경적인 측면에서 우월성이 인정되며, 이후 공정에서도 건조공정이 없고 에틸아세테이트를 사용하지 않으므로 작업공정을 단순화시킬 수 있으며 원가 및 환경적인 면에서 획기적이라 할 수 있다. 또한 결정이 0∼30℃에서 유도되므로 탈수가 양호하여 용매손실은 물론 작업환경이 아주 양호하고 90%이상의 고수율로 좋은 결정을 얻을 수 있으므로 종래 기술에 비해 개선된 제조방법이다.리파마이신류에는 항균활성을 나타내는 여러 가지 많은 화합물들이 있는데, 이 중 1-아미노-4-메틸피페라진과 3-포르밀리파마이신 SV와의 축합물질(리팜피신)은 전염병, 폐결핵 및 나병의 화학요법제로 널리 이용되고 있다. 또한, 1-아미노-4-사이클로펜틸피페라진과 3-포르밀리파마이신 SV와의 축합물질(리파펜틴)은 독성이 적고 광범위 스펙트럼의 항균능을 가지며, 급성 폐질환 치료에 유용할 뿐만 아니라, 마이코박테리움 아비움에 대해 항균력을 가지고 있으며, 마이코박테리움 투버쿨로시스에 대해 리팜피신보다 10배 정도의 효력이 있다고 알려졌다. 종래 피페라지닐이미노 리파마이신의 제조방법을 보면, 3-포르밀리파마이신 SV를 녹이는데 고가의 테트라하이드로푸란을 사용하였으며, 이후 정제공정에서는 진공하에서 반응용매인 테트라하이드로푸란을 완전히 증발시켜야 하는데, 이때 생성물이 열에 의해 변화될 수 있는 가능성이 높고, 불순물의 생성율이 높으며 에너지손실은 물론 환경파괴를 야기할 수 있다. 더욱이, 이 방법은 제조원가가 높고 공정이 복잡함은 물론 작업환경이 까다로우며 수율이 55%밖에 되지 않는 등의 단점이 있다. 본 기술은 이러한 단점을 극복하여, 제조공정이 보다 단순화되고 생성물의 수율이 향상된 피페라지닐이미노 리파마이신의 제조방법을 제공한다
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- 2001-05-16
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
(S)-7-메틸캄토테신을 산 존재하에 포름알데하이드원과 아민류를 사용하여 만니히 반응(Mannich Reaction)을 시킴으로써 간단한 공정으로 뛰어난 항암효과를 지닌 캄토테신 유도체를 제조하는 방법으로, 종래에 7-아미노에틸 캄토테신 유도체와 전합성을 통한 그의 합성법이 보고된 바 있으나 제조공정이 복잡하여 보다 간편한 공정으로 캄토테신 유도체를 대량 생산하는 방법이 요구되었다. 즉, 본 기술은 캄토테신 유도체 및 약제학적으로 허용가능한 염의 제조방법에 관한 것으로, 뛰어난 항암효과를 갖는 7-위치에 치환된 캄토테신 유도체를 보다 간편하고 경제적으로 합성할 수 있는 방법이다캄토테신은 1966년 캄토테카 아쿠미나타라는 식물의 줄기에서 최초로 분리동정된 이래 많은 연구가 진행되어 왔다. 임상실험 결과 독성이 심하여 약으로 개발되지는 못하였으나 1985년 토포아이소머라아제 I 을 억제한다는 특이한 약물 작용기전을 발표하면서 새로운 관심을 끌게 되었다. 최근, 캄토테신의 독성은 감소시키고 약효를 증가시키기 위해 그 유도체에 대한 많은 연구가 진행되어 왔으며 그 중에서 1986년 일본 야쿠르트 혼샤에 의해 합성된 CPT-11 (irinotecan)이 임상시험 결과 우수한 항암 활성 및 낮은 독성을 나타내는 것으로 보고되었다. 그 외 스미스클라인 비참사에서 개발된 토포테칸 (topotecan), 글락소에서 개발된 MDO-캄토테신, 9-아미노캄토테신 등이 있으며, 이 중 CPT-11과 토포테칸(topotecan)이 상품화되었다. 이에 본 기술은 (S)-7-메틸캄토테신을 사용하여 복잡한 제조공정을 간단히 함으로써 항암효능이 뛰어난 캄토테신 유도체를 대량으로 생산하는 방법이다
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- 2001-06-21
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
혈관신생저해작용을 갖는 새로운 물질인 5-데메톡시푸마질롤 유도체 및 그 제조방법에 관한 것이다. 현재까지 혈관신생을 저해하는 푸마질린계 화합물들은 많이 보고되어 있다. 예를 들어, 토양시료로부터 분리된 생산균주 아스퍼길루스 푸미가투스를 배양하면 혈관신생 저해작용을 갖는 푸마질린이 생산되는 것으로 알려져 있다. 이외에도 6-아미노-6-데옥시 푸마질롤, 6-아실, 6-O-술포닐, 6-O-알킬, 6-O-알킬, 6-O-(N-치환된 카바모일) 푸마질롤 등이 혈관신생 저해작용을 나타내는 것으로 보고 되어있다. 그러나 보다 독성이 적고 보다 뛰어난 효과를 갖는 혈관신생 저해제의 지속적인 개발이 요구되고 있다. 이에 본 기술에서는 종래보다 우수한 혈관신생 저해효과를 가지면서 안전한 화합물로서, 5-데메톡시푸마질롤에서 유도되는 신규한 5-데메톡시푸마질롤 유도체를 개발하게 되었다. 본 기술의 목적화합물은 다양한 방법으로 제조할 수 있으며, 대표적으로는 카바모일반응, 아실화반응 및 카보네이트화 반응 등을 통해 제조할 수 있다. 본 기술에 의해 제조되는 5-데메톡시푸마질롤 유도체 또는 그의 염은 우수한 혈관신생 저해효과를 가짐으로써 항암제 또는 암전이 억제제로 사용하거나, 류머티스 관절염, 건선 및 당뇨병성 망막증 등의 치료제로서 사용할 수 있다혈관신생(angiogenesis)이란 새로운 모세혈관이 생성되는 현상으로 이는 정상적인 생리작용의 하나일 뿐 아니라 다양한 질병에서 일어나는 병적인 현상의 하나이다. 혈관신생은 고형암의 성장과 전이, 류마티스성 관절염, 당뇨병성 망막증, 건선 등과 깊은 관계가 있으며, 특히 혈관신생을 저해함으로써 고형암을 치료할 수 있다는 새로운 개념을 제안되었다. 혈관신생 저해제를 이용한 항암제 임상연구 결과에 의하면 일반적인 항암제의 문제점이라 할 수 있는 부작용 및 다제 내성 문제가 크지 않을 것으로 예상되고 있다. 즉, 혈관신생 저해제는 암세포에 직접 작용하기보다는 생체의 내피세포에 작용함으로써 내성 문제가 일어날 가능성이 적고 현재 임상적으로 사용되는 항암제와의 병용요법에 의한 항암효능 증대에 기여할 것으로 기대된다. 본 기술에 따른 5-데메톡시푸마질롤 유도체의 일반적인 독성을 평가하기 위하여 마우스를 사용한 급성독성시험을 실시한 결과, 단회 경구투여시 각 화합물의 LD50은 2.5g/kg 이상으로 상당히 안전한 화합물로 평가되었으며, 또한 in vitro 혈관내피세포 증식저해활성 실험결과 본 기술의 화합물 및 그 염은 혈관내피세포의 증식을 강력하게 억제하여 혈관신생을 저해함을 알 수 있었다
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- 2001-05-20
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보건·의료 > 원료의약 대량제조 기술
캄토테신과 그 유도체 합성 중간체의 부제합성방법에 관한 것이다. 캄토테신은 한 개의 부제탄소를 가지는 광학활성 화합물로 천연에서 얻어지는 20(S)의 배열을 갖는 캄토테신만이 생리활성을 나타낸다. 20-위치가 저급 알킬기인 캄토테신의 유도체들은 본 기술에서 합성하고자 하는 중간체 화합물 (S)-4-알킬-6-옥소-1,4,7,8-테트라히드로-4-히드록시피라노[3,4-f]인돌리진-3,10(6H)-디온으로부터 쉽게 합성될 수 있으므로, 본 기술의 상기 중간체 화합물의 부제합성은 캄토테신 유도체의 부제합성에 있어 가장 중요한 과제이다. 이에, 본 기술에서는 종래의 제조방법들의 결점을 보완하고, 대량합성이 가능할 뿐만 아니라 20-위치가 저급 알킬기로 치환된 광학순도가 높은 20(S)-캄토테신 유도체를 합성하는 방법으로, 샤플리스의 부재 디히드록시화를 응용하여 본 기술의 중간체 화합물 (S)-4-알킬-6-옥소-1,4,7,8-테트라히드로-4-히드록시피라노[3,4-f]인돌리진-3,10(6H)-디온을 부제합성하는 방법을 개발하였다. 즉, 본 기술은 4-에틸-6,6-(에틸렌디옥시)-7,8-디히드로-1H-피라노[3,4-f]인돌리진-3,10(4H)-디온으로부터 디올 화합물을 부제합성하고, 그로부터 (S)-캄토테신 유도체의 합성에 유용한 본 기술의 중간체인 케톤 화합물을 합성하는 방법을 제공한다캄토테신은 DNA의 이중 사슬 중 한쪽 사슬을 절단하고 재결합하는데 관여하는 토포아이소머라제 I 효소의 기능을 특이적으로 저해하는 새로운 작용기전에 통해 강한 항암효과를 나타내는 것으로 알려져 있다. 그러나, 천연에서 얻어질 수 있는 20(S)-캄토테신의 낮은 식물 함유량과 제한된 양 때문에, 대부분의 경우 라세미형인 20(R, S)-캄토테신을 합성한 후 광학분할 방법으로 분리하여 20(S)-캄토테신 광학 활성 화합물을 수득하거나, 또는 부제 보조제를 이용한 부제합성에 의해 광학활성 유도체를 수득하였다. 그러나, 광학 분할방법은 최대수율이 이론상으로도 50%를 넘지 못하여 경제성이 떨어질 뿐 아니라 조작이 번잡한 단점이 있고, 또 부제 보조제를 사용하는 경우에는 부제 보조제의 부착 및 이탈반응을 수행해야하므로 반응단계가 길어지고 고가의 부제 보조제를 당량으로 사용해야하며, 회수공정의 문제점도 남게된다. 본 기술에서는, 공지의 방법으로 제조한 4-에틸-6,6-(에틸렌디옥시)-7,8-디히드로-1H-피라노[3,4-f 인돌리진-3,10(4H)-디온으로부터 DHQD-리간드 유도체를 이용하여 높은 입체선택성으로 부제합성된 디올 화합물을 요오드와 탄산칼슘으로 산화반응시켜, 락톤 화합물 (S)-13을 수득한 다음, 이 화합물(S)-13을 산 가수분해하면, 약리활성을 갖는 천연 캄토테신을 비롯한 (S)-배열의 캄토테신 유도체를 합성하는데 유용한 본 기술의 중간체 케톤 화합물을 부제합성할 수 있다
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-18
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
인체 인터루킨-6의 70번째 라이신잔기를 글루타민산으로 치환하고, 80번째 글루타민산잔기를 라이신으로 치환된 변이형 인체 인터루킨-6이며, 종래 세포독성, 불안정성 등의 문제점이 있어 치료제로의 사용이 어려웠던 인체 인터루킨-6의 안정성을 향상시켜 효과적인 항암제나 면역치료제로 이용될 수 있다.인체 인터루킨-6은 T 세포, B 세포, 단핵세포 등 다양한 세포로부터 분비되는 사이토카인으로, B 세포의 항체 생산, 세포분화 촉진작용, 세포성장의 증식작용 등 다양한 작용이 있다. 또한 인체 인터루킨-6는 MCA 육종, MC 콜론 선암, 흑색종 및 폐암종 등에 항암 효과를 가지는 것으로 보고된 바 있으며, 류머티스 관절염, 심장 점액종 등의 자가면역질환과 다발성 골수종, 림프종 및 백혈병 등의 종양과도 관련이 있는 것으로 알려져 인체 인터루킨-6를 항암제나 면역 치료제로 개발할 수 있을 것으로 기대되어 왔다. 그러나, 인체 인터루킨-6는 세포독성, 불안정성 등의 문제점이 있어 치료제로의 사용에 어려움이 있다.이에 단백질 공학적인 방법으로 인터루킨-6의 아미노산을 치환한 길항성 변이형 인터루킨-6을 이용하여 세포의 수용체와 결합을 변화시킴으로써 신호전달과정을 변화시켜 치료 효과를 얻고자 하였는데, 본 기술의 변이형 인터루킨-6들의 비활성도(specific activity)는 약 1×108 U/mg으로써, 기존의 재조합 인터루킨-6과 비슷하였다.인터루킨-6의 안정성을 증가시키기 위해, 70번째 라이신에 치환될 수 있는 아미노산으로는 글루타민산, 아스파라긴산이나 알라닌 등이 선택될 수 있고, 80번째 글루타민산에 치환될 수 있는 아미노산으로는 라이신, 아르기닌 또는 알라닌이 선택될 수 있다.
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-23
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
스타필로코커스속 균주가 생산하는 혈전용해능을 가지는 새로운 스타필로키나제로서, 스타필로코커스속 균주로부터 혈전용해능이 우수한 오레우스 균주를 선별하고, 이로부터 스타필로키나제를 확인하여 그의 유전자를 분리하고 그 염기 서열 및 아미노산 서열을 결정함으로써 기존의 혈전용해제의 단점을 극복한 새로운 혈전용해성 단백질을 제공한다. 스타필로코커스속 균주를 피브린 플레이트 분석방법 등으로 조사하여 스타필로코커스 오레우스 ATCC 29213 균주가 혈전을 용해하는 기능이 우수함을 확인한 다음, 배양 상등액으로부터 새로운 혈전용해 활성을 가지는 15 kDa의 스타필로키나제를 얻은 후, 그 아미노산서열과 유전자 및 DNA 염기서열을 분석하였다.플라즈미노겐 활성인자를 정맥주사하여 혈전용해계를 활성화하는 치료법이 지난 30여년간 보편적으로 사용되어 왔는데, 혈전에 대한 특이성이 없으므로 치료기간 동안에 전신출혈 등의 부작용이 보고되었다. 최근 자연계의 여러 생물에서 존재하는 혈전용해성 물질을 광범위한 탐색 기술을 활용하여 새로운 혈전용해제로 개발하려는 많은 시도가 이루어져, 이미 은행잎 추출성분과 지렁이로부터 분리된 6가지의 혈전용해제들이 개발되어 상품화되었다.한편, 미생물에서 분리된 스타필로키나제는 인간 플라즈미노겐의 강력한 활성제로 알려져 있는 단백질로서, 혈전용해능이 우수하여 새로운 혈전용해제로 기대되고 있다.본 기술에서는 스타필로코커스 오레우스 균주에서 혈전용해 활성을 가진 물질을 분비함을 확인하고, 이로부터 스타필로키나제 유전자를 분리하고 아미노산 서열을 분석하여 다른 스타필로키나제와 비교한 결과, 기존에 알려진 3개의 스타필로키나제 변형체들은 아미노산 번호 11번, 34번, 36번, 43번 위치에서 아미노산이 치환되었는데, 본 스타필로카나제는 지금까지 알려지지 않은 33번 위치에서 아미노산이 치환된 것으로 나타났으며, 또한 아미노산 번호 36번 위치의 아미노산은 기존의 변형체가 글리신이나 라이신으로 치환되는데 반하여 음 전하를 가지는 글루탐산으로 치환되어 전체 단백질의 구조에 영향을 주는 전하 변화가 있는 새로운 스타필로키나제임을 알 수 있다. 본 스타필로키나제는 혈전용해 활성이 우수하여 급성 심근경색, 뇌경색 등을 치료하는 혈전용해제로 이용될 수 있다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-22
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일반기술
보건·의료 > 약물작용점 발굴 기술
인간 면역결핍 바이러스(HIV-1)에서 항원성이 높은 부위인 표면 단백질 gp41에 대한 단일클론 항체, 이를 생산하는 융합세포주로서, HIV-1 표면 단백질 gp41중의 MAP-1의 합성 펩타이드를 마우스에 면역화시켜 융합세포주를 제조하고 이로부터 펩타이드의 아미노산 서열에 높은 특이성을 보이는 마우스 단일클론 항체를 분리하여 그의 항원 특이성 등을 확인함으로써 HIV-1 감염을 효과적으로 진단하는 항체를 얻는다. 우선 HIV-1이 표면 단백질 gp41중 아미노산 번호 584-618 서열의 35개 아미노산으로 이루어진 직쇄상 펩타이드 2개를 포함하는 MAP-1 합성 펩타이드를 설계하여 제조한 다음, MAP-1 합성 펩타이드를 이용하여 마우스를 면역화시키고 이로부터 추출한 비장세포와 마이엘로마 세포를 융합시킨 후 MAP-1 합성 펩타이드 및 HIV-1 표면 단백질 등에 특이성을 보이는 세포 클론을 효소면역측정법으로 선별함으로써, HIV-1의 표면 단백질 gp41을 특이적으로 인식하는 단일클론 항체를 제조하는 방법이다.단일클론 항체는 다양한 반응 시약을 포함하는 HIV-1 항원 또는 항체 진단키트 등을 개발하는데 이용될 수 있으므로, 면역결핍 질환 등을 효과적으로 진단할 수 있다후천성 면역결핍증(AIDS)을 유발하는 주요한 병원체로 알려진 HIV-1은 생체에 감염되는 경우, 바이러스의 표면 단백질인 gp120 단백질이 생체 면역계에 존재하는 T세포에 있는 CD4에 부착하고 이는 다시 표면 단백질 gp41과 융합하는 과정 등을 거쳐 바이러스 입자가 세포내로 들어간다고 알려져 있다. AIDS를 진단하기 위하여 HIV 항체 또는 항원을 검색하는 효소면역측정법이 많이 활용되는데, 실제로 HIV-1의 gp41 단백질, gp36 단백질 및 이들로부터 유래한 펩타이드들이 항원으로 이용되었다. 그러나, 재조합 단백질 항원들은 정제 과정이 복잡하여 가격이 비싸고, 펩타이드 항원은 비용은 저렴하나 코팅 효율과 항원성이 낮은 단점이 있었다.본 기술은 면역화에 사용되는 펩타이드를 다가지 항원 펩타이드(multiple antigenic peptide, MAP) 형태로 합성하여 바이러스 항체를 검색하는 강력한 코팅 항원뿐만 아니라, 백신 등을 개발하는데 사용되는 효과적인 항원이 될 수 있도록 제조하였다.제조된 단일클론 항체는 알코올 분해효소와는 전혀 반응하지 않는 반면, HIV-1 gp41 펩타이드를 포함하는 HIV-1 gp160 단백질과는 특이적으로 반응하므로 마우스 융합세포주가 생산하는 단일클론 항체는 사람의 혈액 내에 존재하는 HIV-1의 표면 단백질 항원을 검색하는데 사용될 수 있다. 또한, 이를 AIDS 환자의 혈청에 존재하는 HIV-1 표면 단백질 gp41에 대한 항체와 경쟁적으로 반응시키면 환자 혈청 내의 상기 항체의 농도를 결정할 수 있는 장점이 있다. 따라서 후천성면역결핍증, 면역결핍질환등을 진단하는 데 유용하게 이용될 수 있다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-21
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일반기술
보건·의료 > 약물작용점 발굴 기술
B형 간염 바이러스(HBV)의 X 단백질에 특이적으로 반응하는 단일클론 항체를 이용하여 간질환을 진단하는 것으로, HBV 단백질중 HBV에 의한 간염을 간암으로 이행시키는 기작에 직접적으로 관여하는 것으로 추정되는 조절 단백질인 X 단백질을 특이적으로 인식할 수 있는 단일클론 항체를 개발하고, 이를 이용하여 인체 간질환을 임상학적으로 진단할 수 있는 진단용 조성물이다. 먼저 HBV의 X 단백질 면역원을 제조하여 생쥐에 주사한 다음, 생쥐의 비장세포를 수득하여 생쥐의 마이엘로마 세포와 융합시켜 X 단백질 항원에만 특이적으로 반응하는 하이브리도마 세포군을 엘리자 분석방법(ELISA)으로 선별한 후, 수득된 하이브리도마 세포주로부터 항-X 단일클론 항체 IgM을 분리정제하고, 이를 유효성분으로 포함하는 간질환 진단용 조성물을 제조한다.HBV는 DNA 바이러스로서 감염이 되면 간염 또는 간경변이 유발되고 만성간염으로 되는 경우 간암으로까지 이행한다고 알려져 있다. HBV의 조절 단백질인 X 단백질은 약 154 개의 아미노산으로 구성된 분자량 17kDa 정도의 단백질로서, HBV에 의해 유발된 간염에서 간암으로 이행하는 기작에 직접적으로 관여하는 것으로 추측되고 있다. 따라서, X 단백질에 대한 단일클론 항체를 사용하면, 혈액 내의 X 단백질의 수준을 정확히 측정할 수 있어 간염 바이러스에 의해 유발되는 질환인 간염 및 간암 등을 확실하게 진단할 수 있을 것이다. 본 기술에서는 정상인과 급성 및 만성 간염환자에서는 HBV의 X 항원에 대한 항체를 나타내지 않았으나, 간경변환자의 경우는 11명중 7명이, 간암 환자는 19명중 12명이 항체반응을 나타내었다. 이는 만성 간염 환자가 간경변이나 간암으로 이환되는 과정에서 항원의 HBV X 단백질의 발현이 빈번하게 또는 고농도로 이루어져 이에 대한 항체 생성이 유발된다는 것을 알 수 있다. 또, 본 기술의 혈청내 HBV X 항원은 항체 측정과 마찬가지로 정상인과 급성, 만성간염 환자에서는 검출되지 않았으며, 간경변환자와 간암환자에서만 낮은 빈도로 검출되었다. 이는 항체와 달리 HBV X 항원의 분자량이 매우 적어 항원성이 낮은 것에 기인하는 것으로 여겨진다. 그러나 HBV X 항원에 대해 항체가 생성되는 양상이 간경변 환자와 간암 환자에게서 주로 나타나는 것으로 보아 HBV X 항원과 항체의 검색이 만성간염에서 간경변이나 간암으로서의 이환과 상관관계가 있는 것을 알 수 있다. 항-X 단일클론 항체 IgM을 이용하여 발현 암세포를 검색할 수 있으며, 간염 바이러스에 의한 간질환, 간염 그리고 간암과의 상관관계 및 임상적인 진단용으로도 사용할 수 있을 것이다.
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-21
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일반기술
보건·의료 > 약물작용점 발굴 기술
인간 면역결핍 바이러스-1(HIV-1)의 주요한 덮개(major capsid) 단백질 p24 에 대한 단일클론 항체, 이를 생산하는 융합세포주와 p24의 일부 아미노산 서열을 포함하는 다가지 항원 펩타이드에 관한 것으로, 항-폴리클론 HIV-1 p24 염소 항체에 대하여 매우 반응성이 높은 HIV-1 p24 단백질의 합성 펩타이드를 이용하여, p24 단백질에 높은 특이성을 나타내는 마우스 단일클론 항체를 분리하여 그의 항원 특이성 등을 확인함으로써 HIV-1 감염을 진단하는 항체를 얻는다. HIV-1 p24 단백질중 가장 항원성이 높은 부분인 아미노산 번호 202-221의 서열을 포함하는 직쇄상 펩타이드를 4개의 가지로 된 항원 펩타이드 MAP-7을 마우스에 면역화시키고 이로부터 추출한 비장세포와 마이엘로마 세포를 기존의 방법으로 융합시킨 후 마우스 단일클론 항체를 효소특정법으로 선별함으로써, HIV-1 p24 단백질을 특이적으로 인식하는 단일클론 항체를 제조한다. 마우스 융합세포주가 생산하는 단일클론 항체는 HIV-1 p24 단백질을 인식하는 높은 특이성을 가지므로, 상기 단일클론 항체 및 HIV-1 항원을 이용한 진단키트의 개발로 면역결핍 질환 및 HIV 감염 초기의 환자를 효과적으로 진단하는데 유용하게 이용할 수 있을 것이다후천성 면역결핍증(AIDS)을 유발하는 주요한 병원체로 알려진 HIV-1의 감염여부 진단에는 HIV의 항체항원을 검색하는 효소면역측정법이 많이 활용되는데, 종래의 재조합 단백질 항원들은 정제 과정이 복잡하여 가격이 비싸고, 또 펩타이드 항원은 비용은 저렴하나 코팅 효율과 항원성이 낮은 단점이 있었다.한편 HIV-1 p24는 HIV 유래의 RNA와 복제 효소 등을 보호하는 덮개 역할을 하며, 바이러스 입자의 형성에 중요한 역할을 담당하며, HIV의 감염 초기에 HIV-1 p24 단백질 항원의 농도가 매우 높아지는 것으로 알려져 있다. 따라서 HIV-1 양성 혈청내 p24 단백질의 존재는 HIV 감염을 알려주는 지표가 된다. 본 기술에서는 단일클론 항체가 HIV-1 p24(202-221) 합성 펩타이드 및 p24 단백질에 대하여 선별적으로 높은 항원 인식능력을 나타냄을 확인하였고, MAP-7 합성 펩타이드 및 p24 단백질과 특이적인 효소면역반응을 수행함을 확인하였다. 또한 마우스 융합세포주가 생산하는 단일클론 항체는 사람의 혈액내에 존재하는 HIV-1 의 p24 단백질 항원과 플레이트에 코팅한 p24 펩타이드를 경쟁적으로 반응시키면 HIV 환자 혈청내의 p24 항원의 농도를 결정할 수 있을 뿐만 아니라 HIV 진단에 이용될 수 있다. 따라서 본 단일클론 항체는 HIV-1 p24 단백질 항원 진단키트를 개발하는데 이용될 수 있다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-21
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
신이(Magnoliae flos) 추출물과 신이로부터 분리한 리그난 화합물 및 이를 유효 성분으로 하는 혈소판 활성화인자(PAF; platelet-activating factor) 수용체에 작용하는 길항제에 관한 기술이다. 본 기술은 천연식물인 신이로부터 PAF 수용체에 작용하는 길항활성을 가지는 물질을 확인하여 이로부터 2종의 새로운 리그난 화합물을 분리하고, 이 화합물을 이용하여 PAF 수용체의 작용을 저해하는 길항활성을 조사함으로써 PAF 수용체와 관련된 염증 질환의 예방 및 치료제 등을 제공한다. 본 기술은 신이로부터 길항활성을 발견하고, 신이를 저급 알코올로 추출하고 여과하여 감압 농축한 다음 증류수로 현탁하고 헥산으로 세척하여 에틸아세테이트로 다시 추출하고 흡착 크로마토그래피를 반복 수행하여 새로운 리그난 화합물을 제조하고 이들 및 그 유도체들을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물을 PAF 인자 수용체에 작용하는 길항제로 제조하는 기술이다. 본 기술에 의하면 상기 리그난 화합물 및 신이 추출물은 PAF 수용체에 대한 길항활성이 매우 우수하였으므로, PAF와 관련된 염증 질환의 예방 및 치료제, 치료보조제 또는 임신과 난자 착상의 조절제로 유용하게 사용될 수 있다PAF는 염증 매개물질인 히스타민, 루코트리엔 및 프로스타글란딘 등보다 저농도에서 염증 세포를 활성화할 수 있어 다른 염증 매개물질이 합성되어 방출되는 과정을 유도하는 급성 염증반응의 개시인자로 작용한다. 따라서 혈소판 활성화 인자가 작용하는 염증 반응이 활성화되면 기관지 수축, 천식, 조직이식 거부반응, 내독소에 의한 쇼크, 위궤양, 급성 알레르기 반응, 과민성 피부염 등 다양한 염증 질환이 유발된다. 한편, 신이(Magnoliae flos)는 목련과에 속하는 중국산 신이의 피지 않은 꽃봉오리(화뢰)를 건조한 것으로 매운 맛을 가지고 있다. 예로부터 신이는 거풍, 통규의 효능이 있어 두통, 악성비점막궤양, 축농증 및 치통 등을 치료하는데 사용되었고, 일부 방향약으로도 사용되었다. 본 기술에서는 전통 천연식물로부터 PAF 수용체에 작용하여 길항활성을 나타내는 새로운 물질을 얻기 위한 과정에서 신이로부터 길항활성을 발견하여, 새로운 리그난 화합물을 분리하였다. 본 기술의 PAF 수용체에 작용하는 길항제는 생체내 또는 생체외에서 PAF의 활성조절에 이용될 수 있는데, 즉 천식, 알레르기, 관절염, 신장염, 비염, 아토피성 피부염, 심장과민증, 내독소 쇼크, 중추신경계 손상 또는 장기(조직)이식 거부반응 등의 질환의 예방 및 치료제, 임신과 난자착상 조절제로서 유용하게 사용될 수 있다
- 보유기관
- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-23
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보건·의료 > 임상시험·진단관련
사람 혈구에 대한 생쥐 응집 단일클론 항체의 Fab 부위와 이를 암호하는 중쇄와 경쇄 cDNA 유전자, 그들의 염기 서열 및 이를 포함하는 플라스미드 벡터에 관한 기술이다.본 기술은 인간화 항체 등을 개발하는데 유용한 사람 혈구에 대한 생쥐 응집 항체 Fab 부위의 유전자를 생쥐세포 클론 HAG 12에서 클로닝하여 그의 염기서열을 결정하고 그의 특성을 확인함으로써 바이러스 감염을 효과적으로 예방하고 진단하는 방법이다.본 기술은 생쥐세포 클론 HAG 12로부터 RNA를 추출하여 사람 혈구에 대한 생쥐 응집 단일클론 항체의 Fab 부위를 암호하는 경쇄 및 중쇄 유전자의 cDNA를 합성하고, 그 아미노산 서열 및 염기서열을 분석하여 제공하고 있으며, 상기 cDNA 유전자들을 플라스미드 벡터에 각각 클로닝하여 제조된 플라스미드 벡터 pYBM-AL 및 pYBM-AH를 제공한다. 본 기술에 의하면 상기 cDNA 유전자는 기능적이므로 이를 인간 항체 유전자와 결합시켜 발현시키면 HIV, HBV, CMV 및 기타 바이러스 등 혈액내 항원을 진단하는데 유용하게 사용할 수 있다인간의 질병에 대한 진단이나 치료에 있어서 항원-항체 반응을 이용한 면역학적 방법이 많이 이용되고 있다. 근래에는 단일클론 항체를 이종의 항원을 화학적으로 항체에 결합시킨 복합 항체의 형태나 항원과 결합하는 부위의 유전자를 조절한 형태 등의 키메라 항체로 개량하려는 시도들이 있어, 질환의 진단이나 치료에 있어 그 비중이 증가되고 있다. 한편 인간화 항체는 생쥐단일클론 항체의 가변영역 중에서 항원과 직접 결합하는 CDRs 영역을 사람 항체에 이식시켜 제조할 수 있다. 이를 위해서는 생쥐 항체 가변영역을 얻고 이를 유전자 재조합 방법으로 사람 항체의 유전자와 융합시켜 동물세포에서 발현시킨다. 본 기술의 사람 혈구에 대한 생쥐 응집 단일클론 항체 유전자의 항원-결합 절편 부위의 중쇄와 경쇄를 암호하는 cDNA는 모두 항체의 일반적인 특성 및 그 이소타입에 상응하는 염기서열들을 소유하고 있어 이들 항체 cDNA가 기능적인 것임을 시사해준다. 본 기술에서 개발된 cDNA를 이용하여 공지의 방법에 따라 생쥐 단일클론 항체의 Fab 부위 중에서 항원과 직접 결합하는 CDRs 영역을 사람항체에 이식시켜 인간화 항체를 제조하면, 인체에 주사하였을 때 면역반응을 최소화할 수 있고 인간의 적혈구에 결합하여 응집반응을 일으키는 재조합 단일클론 항체를 대량 생산할 수 있으며, 이것을 이용하여 사람 적혈구와 관련된 HIV 등의 혈액내 항원을 진단하는 인간화 항체를 개발하는데 사용할 수 있다
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2001-06-23
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